蝴蝶兰ACC合成酶(ACS)反义基因植物表达载体的构建及遗传转化的综述报告.docx

蝴蝶兰ACC合成酶(ACS)反义基因植物表达载体的构建及遗传转化的综述报告
蝴蝶兰是世界上比较受欢迎的兰花之一，以其优美的花形、色泽和芳香而受到人们的喜爱。而植物的生长和发育过程中，植物生长调节剂也起着非常重要的作用。其中，乙烯是一种广泛存在于植物体内并具有广泛生理作用的生长素，其调节植物的生长发育过程。蝴蝶兰的乙烯合成酶(ACS)是乙烯生物合成途径的第一限速酶。在研究中，对蝴蝶兰ACS反义基因进行研究是十分有价值的。
本报告主要介绍蝴蝶兰ACS反义基因表达载体的构建及其在遗传转化中的应用。
1.蝴蝶兰乙烯生物合成途径
乙烯是生物合成的一种单体有机化合物。在植物中，乙烯的合成过程是在多种条件的共同作用下进行的。乙烯合成酶(ACS)是乙烯生物合成途径的第一限速酶，其催化脱氨基化反应将S-腺苷甲硫氨酸(SAM)转化成1-氨基环丙烷-1-羧酸(AACC)。接下来，ACC氧化酶(OXO)将ACC转化成乙烯。
2.蝴蝶兰ACS反义基因的构建
由于乙烯的调节作用与植物的生长发育密切相关，因此对乙烯合成酶的研究就显得非常重要。近年来，一些学者对植物中ACS基因的反义技术进行了研究，以探究ACS基因在植物生长发育过程中的具体作用。在蝴蝶兰中，针对其ACS基因的反义技术研究也取得了重要进展。植物表达载体是构建反义基因的关键步骤，在反义技术研究中扮演着十分重要的角色。
在蝴蝶兰中，使用RNA干扰技术对其ACS基因进行反义研究，其方法是首先克隆蝴蝶兰ACC合成酶的cDNA，然后嵌入hairpinRNAi表达载体中。其中，反义序列是由500bp的蝴蝶兰ACC合成酶cDNA的最末端序列形成的。这种表达载体可以被植物体细胞所接受和表达，从而具有较好的反义效果。有了这种载体，可以通过遗传转化将其导入到蝴蝶兰中，实现ACS基因的反义表达。
3.遗传转化
遗传转化是将所需要的基因通过外源的方法导入植物体细胞中，使其表达的过程。常用的方法有基因枪法、农杆菌介导法、电转化等。蝴蝶兰的基因转化研究主要采用农杆菌介导法，其步骤如下：
（1）.准备清洁种子苗：将种子苗按时间排列经常规生长、繁殖，到达含有5～6片健康叶的时候，可作为基因转化试材。
（2）.农杆菌菌株的培养：将要转化的载体导入大肠杆菌中，培养得到所需菌株。
（3）.感染蝴蝶兰种子苗：将培养好的农杆菌通过注射器等工具导入蝴蝶兰叶片的细胞里，将叶片放入含有激素和抗生素的固体培养基中。
（4）.诱导愈伤组织：感染的蝴蝶兰叶片受到农杆菌的侵染后，会产生伤口，利用伤口诱导蝴蝶兰愈伤组织的产生。
（5）.筛选转化植株：待愈伤组织产生后，根据特定的标记或抗性选出转化成功的蝴蝶兰植株。
4.结论
本文主要介绍了蝴蝶兰ACS反义基因表达载体的构建及基因转化研究的过程。反义技术可以帮助科学家更好地探究ACS基因在蝴蝶兰生长发育过程中的作用，为优化蝴蝶兰栽培管理提供理论及实践依据。同时，本文介绍的农杆菌介导法也为其他植物材料的基因转化提供了参考。随着遗传技术的不断发展，我们相信未来将有更多的技术被应用于蝴蝶兰研究之中。