大丽轮枝菌V07DF2 T-DNA插入突变体库的构建及表型变异突变体的筛选的任务书.docx

大丽轮枝菌V07DF2T-DNA插入突变体库的构建及表型变异突变体的筛选的任务书
任务书
1、任务目的
本任务旨在构建大丽轮枝菌V07DF2T-DNA插入突变体库，并利用该库筛选出表型变异的突变体，以促进大丽轮枝菌生物学研究的深入。该研究对于探究基因都控制植物发育、生长、生殖等重要性状具有重要意义。
2、任务背景
植物的生长发育进程是一个复杂的过程，涉及到很多与环境交互作用的生物学热点问题。其中，基因在生命过程中发挥着重要的作用，尤其对植物的生长发育及其适应环境的能力具有至关重要的作用。基因的稳定性和可控性在植物研究中至关重要。为了进一步深入了解大丽轮枝菌的基因功能，需要构建一个大规模、可重复、稳定、标准化的T-DNA插入突变体库。
3、任务需求
（1）构建大丽轮枝菌V07DF2T-DNA插入突变体库；
（2）对构建好的突变体库进行筛选及特征描述，筛选出表型变异的突变体；
（3）对筛选出的突变体进行定位分析，初步确定突变体的相关基因；
（4）商讨可行性方案，探究突变体相关基因在大丽轮枝菌生长发育及适应性中的作用机制。
4、任务步骤
（1）构建大丽轮枝菌V07DF2T-DNA插入突变体库
a.筛选V07DF2的T-DNA插入株系，以确认插入情况及插入位点的稀少性；
b.对经确认的T-DNA插入株系进行标准化制备，并构建大规模的V07DF2T-DNA插入突变体库；
（2）对突变体库进行筛选及特征描述，筛选出表型变异的突变体
a.建立一个筛选系统，筛选出突变体中的表型变异者，同时将其与野生型进行对比和鉴定；
b.对筛选出的突变体进行表型特征分类描述。
（3）对筛选出的突变体进行定位分析，初步确定突变体的相关基因
a.分离目标突变体的全基因组DNA，利用PCR技术对T-DNA插入的位置进行分析；
b.对T-DNA的插入位置进行测序，以获得插入位点的详细信息；
c.结合生物信息学分析软件和大丽轮枝菌基因库，初步确定突变体的相关基因。
（4）商讨可行性方案，探究突变体相关基因在大丽轮枝菌生长发育及适应性中的作用机制。
a.对突变体相关基因进行深入研究，探究其生长发育及适应环境的作用机制；
b.对突变体相关基因的功能进行验证，实验可以通过引入质粒进行基因救援的方式完成验证。
5、任务期限
本任务计划在6个月内完成。其中，前三个月为突变体库的构建及筛选期，后三个月为相关基因的探索及验证期。
6、任务成果
（1）一批大丽轮枝菌V07DF2T-DNA插入突变体库；
（2）对突变体库的特征分类描述及突变体相关基因的初步研究成果；
（3）突变体相关基因的研究报告及功能组学研究成果；
（4）论文及其它相关成果。
7、任务风险预测
本任务构建的突变体库中可能存在着颗粒度较大的插入物或者插入物缺失等情况，这些都可能会对后续的筛选及研究带来影响，需加以注意。
8、任务执行人员及其分工
执行人员：A、B两位生物学教师；
分工：A负责筛选大丽轮枝菌V07DF2的T-DNA插入株系，建立筛选系统，分离全基因组DNA并进行PCR分析；
B负责对PCR产物进行测序流程，利用生物信息学分析软件和大丽轮枝菌基因库，对T-DNA插入位点的位置进行分析，并初步确定突变体的相关基因。两人共同完成突变体筛选及特征描述等相关工作。