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稻瘟菌插入突变体库的构建及生长缓慢突变体的筛选的综述报告
稻瘟病是稻米生产中最为严重的病害之一，由稻瘟菌（Magnaportheoryzae）引起。因此，控制稻瘟菌的传播对于保障稻米生产具有重要意义。突变技术是研究稻瘟菌致病机理、筛选抗病育种材料的一种重要手段。本文主要介绍稻瘟菌插入突变体库的构建及生长缓慢突变体的筛选方法。
1.稻瘟菌插入突变体库的构建
稻瘟菌插入突变体库是采用基因组插入技术通过插入突变体方式，来构建包含大量单一插入元件的突变体库，以用于系统研究基因功能和基因组学特征。稻瘟菌插入突变体库的构建需要如下步骤：
1.1稻瘟菌的转化
将稻瘟菌幼胞体质量基因（mass）敲除的构建插入质粒，通过基因枪、孢子电转化等方式将其转化到稻瘟菌菌株中。从转化的候选菌株中筛选出敲除mass基因菌株，确认其与野生菌株有所不同。
1.2插入突变体构建
选择突变株，将插入体PCR扩增出来并纯化，转化到突变株中，利用PCR检测插入突变体的正确性。经过PCR验证的插入体，通过PCR产生的DNA片段长度大小分布，判定插入体的插入位置和数量。不同位置的插入体可构建成具有多个插入突变体库。
2.稻瘟菌突变体的筛选
稻瘟菌插入突变体库的构建后，可通过成熟的构建，酵母半凝胶扩散筛选法、生长缓慢筛选法等多种方法筛选生长缓慢的突变体。下面着重介绍一种生长缓慢突变体筛选法：
2.1筛选方法
将构建培养在液态基础培养基上，用100μL温度为80℃的SDS(0.05%)处理15s，然后快速浸入2.5℃的水中。再洗涤两次，用1.5%琼脂板培养。观察生长缓慢克隆，挑出缓慢生长的菌落分别接种500μL的基础培养基中，以备进一步检测。
2.2筛选分析
将筛选后的重做菌株用PCR扩增插入体，确认插入体的位置和数量，并测定感染水稻的病原性。通过病原性分析和插入体验证，确认生长缓慢突变体之后可以结合先前插入体的位置、基因型等信息，初步推测到应该是因为特定基因功能丧失而出现生长缓慢的现象。
总之，通过稻瘟菌插入突变体库的构建及生长缓慢突变体的筛选方法，可进一步深入研究稻瘟菌的致病机理，为后续的病原机理和育种筛选等领域提供重要的基础和支撑。