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苏云金芽胞杆菌新型cry9基因克隆、表达及活性分析的综述报告
苏云金芽胞杆菌是一种广泛存在于自然界中的土壤细菌，具有很高的生命力和抗逆性，同时能够产生多种生物活性物质。其中，cry9基因编码的晶体蛋白是一种广谱杀虫剂，在农业领域中具有重要的应用价值。本综述将介绍苏云金芽胞杆菌新型cry9基因的克隆、表达及其活性分析情况。
首先，对cry9基因的克隆分离是实现其大规模表达和产业化应用的基础。目前已经有多种方法被运用于cry基因的克隆，如PCR、RT-PCR等。具体到苏云金芽胞杆菌的cry9基因，先前研究通过对菌落PCR鉴定筛选，最终成功克隆出2677bp的cry9基因全长（MaL.etal.,2017）。同时，为了提高克隆效率和准确性，许多研究者也采用了多聚酶链式反应（PCR）方法，通过设计适当的引物和模板DNA，扩增cry9基因，并进行定向克隆（DengW.etal.,2018）。
其次，cry9基因的表达是继克隆后的一个核心问题。目前，cry9基因在不同宿主中的表达情况广泛受到研究和应用。一些同源性较高的大肠杆菌、杆状病毒和酵母等被广泛应用于cry9基因的表达。其中，大肠杆菌是最常用的宿主，通过PCR扩增出cry9基因后，将其与载体质粒进行连接，形成表达质粒。进一步，将质粒转化到大肠杆菌中，利用大肠杆菌自身的表达机制进行表达（AhmadM.etal.,2017）。据报道，目前大肠杆菌表达cry9基因的最高产量可达到375μg/mL(AdangM.J.etal.,1993)。
最后，cry9基因的活性分析会验证其在杀虫方面的效果。依据实验目的的不同，活性分析可以分为体外筛选和体内活性测定。体外筛选主要包括结晶、溶解和纯化等步骤，通过纯化出晶体蛋白后，进行杀虫效果测试。体内活性测定主要采用转化方法，将cry9基因转入目标宿主细胞中，比如受害作物支架甘蓝或者玉米等，测试cry9基因的杀虫效果和安全性（ChakrabartyR.etal.,2020）。
综上所述，对苏云金芽胞杆菌新型cry9基因的克隆、表达及其活性分析，涉及到多个方面，需要综合考虑不同的技术路线和实验方法，才能取得有效的实验成果。然而，随着生物技术的不断发展，越来越多优秀的工具和技术被应用于cry9基因的克隆和表达，在未来的研究中，我们相信苏云金芽胞杆菌新型cry9基因的研究会更加深入，应用价值也会更加显著。