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江苏农业科学２０１３年第４１卷第１１期—３２９—

束琴霞，张鹏，张林，等．发光细菌法快速检测水发产品中甲醛毒性的研究［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（１１）：３２９－３３１．
发光细菌法快速检测水发产品中甲醛毒性的研究

束琴霞１，张鹏２，张林２，邹勇平２
（１．扬州市职业大学，江苏扬州２２５０００；２．江苏省扬州市产品质量检验所，江苏扬州２２５０００）

摘要：介绍一种以发光细菌（青海弧菌Ｑ６７）作为检测活体检测水发产品中甲醛毒性的方法。检测发现随着甲醛
浓度的升高和作用时间延长，青海弧菌Ｑ６７的相对发光强度逐渐降低，作用时间在５ｍｉｎ左右时，甲醛对青海弧菌的

效应拟合曲线线性最好，甲醛对青海弧菌Ｑ６７的ＥＣ５０为０．０４４ｍｇ／ｍＬ，甲醛对青海弧菌的最低检测限为０．０１ｍｇ／ｍＬ。
关键词：发光细菌；甲醛毒性；水发产品；发光强度
中图分类号：Ｘ１３１．２文献标志码：Ａ文章编号：１００２－１３０２（２０１３）１１－０３２９－０２

甲醛是一种无色、有强烈刺激性气味的气体，易溶于水。序列号２６９９００）；隔水式恒温培养箱；移液器。
水发产品中所含甲醛的浓度不高，一般不会急性中毒，但长期试验用菌剂：发光细菌———青海弧菌Ｑ６７（试验用菌为青
食用这些含甲醛的产品，会产生慢性中毒，造成肝、肾损害，诱海弧菌Ｑ６７冻干粉，由华东师范大学提供）。根据比较，青海
发肝炎、肾炎和酸中毒，甚至癌变。因为甲醛具有较好的杀菌弧菌Ｑ６７生长的最适条件是：温度１０～３０℃，ｐＨ值
和防腐作用，一些不法商贩在水发产品中违规使用甲醛对该６．０～９．０，盐度０．８５％（质量分数）。因为青海弧菌与其他发
类产品进行防腐，来保持产品的光鲜度和延长产品的保质期。光细菌如明亮发光杆菌、费氏弧菌等相比较有较宽的温度和
从相关文献来看，还有不少商家无视国家相关法律法规，继续ｐＨ值适应范围及较低的盐度要求，使青海弧菌Ｑ６７在样品
把甲醛添加到水发产品中［１－２］。近年来，随着水发产品用甲预处理、排除干扰因子等方面具有明显的优势，所以本研究选
醛浸泡事件的不断发生，食品的甲醛问题成为公共卫生关注用Ｑ６７为测试细菌。
的焦点，并被列入国家食品安全战略研究的重点。试验用水发产品：随机购自扬州市区的３个菜场和１个
甲醛的常用检测方法主要有变色酸法、乙酰丙酮法、品红批发市场。
亚硫酸光度法、高效液相色谱法（ＨＰＬＣ法）、气相色谱法（ＧＣ１．３试验方法
法）、气－质联用法（ＧＣ－ＭＳ法）等［３］。目前，甲醛测定多采１．３．１菌剂复苏与培养（１）取－２０℃保存的青海弧菌
用比色法，比色法具有仪器价格低廉、操作简单、易于推广等Ｑ６７冻干粉，加入５ｍＬ０．８５％（质量分数，下同）的ＮａＣｌ溶
优点，但是由于基于化学反应的原理，专属性不够，容易受到液，充分混合后于２０℃放置１５ｍｉｎ，使青海弧菌Ｑ６７恢复稳
性质相似物质的干扰；ＨＰＬＣ法、ＧＣ法、ＧＣ－ＭＳ法等仪器分定发光，所得菌液待用。（２）发光细菌的培养：青海弧菌培
析方法虽具有更强的选择性和更高的灵敏度，但检测所用仪养。培养基配方：Ⅰ号，混合盐１２．４９ｇ，酵母膏５ｇ，胰胨５ｇ，
器设备和检测成本投入要求较高，故无法很好地推广。本研甘油３ｍＬ，加水至１０００ｍＬ，ｐＨ值９．０；Ⅱ号，混合盐１０ｇ，
究尝试使用一种以发光细菌———青海弧菌Ｑ６７作为检测活硫酸铵４．２ｇ，葡萄糖１０ｇ，甘油３ｍＬ，胰胨１ｇ，加水至

体检测水发产品中甲醛毒性的方法，为相关的项目检测和行１０００ｍＬ，ｐＨ值８５。混合盐成分：ＭｇＳＯ４５．０７ｇ，ＭｇＣＯ３

业监管提供新的技术支持。２．２５ｇ，ＭｇＣｌ２０．１９ｇ，ＣａＣＯ３０．０６ｇ，ＫＣｌ０．４４ｇ，ＮａＣｌ１６．５９ｇ，
ＫＢｒ０．２４ｇ。塞上棉球，用牛皮纸包扎好，经１２１℃高压灭菌
１试验部分
２０～３０ｍｉｎ后备用［４］。固体培养基：以上配方加２％琼脂即
１．１发光细菌法的测定原理为固体培养基。电炉加热使溶解至透明，趁热用漏斗分装于
发光细菌体内的荧光素酶催化荧光素的氧化作用产生生试管中，每支试管装至１／３，塞上棉球，用牛皮纸包扎好，经
物发光，生物发光直接与细胞的活性及代谢状况相关。毒性１２１℃高压灭菌２０～３０ｍｉｎ后，取出制成斜面。培养：将青海
物质会改变细胞的状态，包括细胞壁、细胞膜、电子的转移系弧菌冻干粉用０．５ｍＬ０８５％ＮａＣｌ溶解，迅速转入５０ｍＬ培
统、酶及细胞质的结构，这些变化最终导致生物发光的减弱。养液中，２２℃恒温培养，每２４ｈ后转接１次斜面，将培养好的
通过生物发光强度的测定即可计算得到水发产品甲醛毒性的第３代斜面置于４℃冰箱中备用。将培养好的菌种接入固
强弱。体培养基平板中，２２℃恒温培养１２～１８ｈ后备用［５］。（３）
１．２试验仪器及耗材检测用菌液制备