进出口食品中曲酸的测定_液相色谱-质谱_质谱法_编制说明.doc

《进出口食品中曲酸的测定方法》
编制说明
一、标准制定的任务来源及意义
1、任务来源
本标准是根据国家认证认可监督管理委员会下达的任务，名称为《进出口食品中曲酸的测定方法》，计划编号为2009B518，由中华人民共和国江苏出入境检验检疫局负责制定，本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
食品添加剂作为食品工业不可缺少的原料，使食品锦上添花，但近年来，食品加工中滥用食品添加剂的事件屡屡发生。鉴于我国仍有200多种食品添加剂尚无产品检验标准，迫切要求制定标准分析方法，确保进出口食品添加剂检验检疫监管的有效实施。
2、制定标准的意义
曲酸（kojicacid）化学名称5-羟基-2-羟甲基-1，4-吡喃酮，是微生物好氧发酵产生的一种具有抗菌作用的有机酸。

图1曲酸化学结构式
分子式：C6H6O4
分子量：142.1
性状：无色棱柱状晶体,熔点153℃-154℃。
溶解性：易溶于水、醇、丙酮，微溶于醚、乙酸乙醋、三氯甲烷和吡啶，不溶于苯。
我国现已批准使用的防腐剂有30种，绝大多数为化学防腐剂，往往在安全性方面存在一定的问题。曲酸是某些微生物生产过程中不经糖代谢产生的一种弱酸性化合物，是一类新型的天然防腐剂，与传统的食品防腐剂相比，它具有易溶于水，不为细菌所利用，热稳定性好，PH值稳定性好以及对人体无刺激性等多项优点。
曲酸有杀菌抗虫作用，作为食品防腐剂、保鲜剂和护色剂使用效果明显，可替代苯甲酸钠广泛应用于肉食品加工护色、果蔬保鲜和生食品的杀菌防腐，还可用作切花保鲜，延长鲜花保存及货架期等。此外，曲酸还可作为农作物的生长促进剂，对粮食和蔬菜有明显的增产效果，一般配制成低浓度水剂作为叶面肥喷施。由于其普遍认可的安全性，在世界各国食品行业应用非常广泛。
但在2005年，日本却意外指出曲酸具有致癌性，并于同年8月宣布禁止将曲酸作为食品添加剂使用。尽管曲酸目前在欧盟、美国、中国等国尚未认定有致癌性，但自其问世以来，围绕这个问题的争议却一直不断。早期因为曲酸提取不纯，可能掺杂有强致癌物质黄曲霉素，一度引起科学家们的质疑。2000年和2002年下半年，又相继有科学家对曲酸本身的致癌性提出疑问。有专家称曲酸分子式中的吡喃是与苯一样的芳香性化合物，从理论上讲是和苯一样有致癌性的。此外曲酸中的羟基也可使人体内积累游离基，这也是有致癌性的。
国家质检总局在对日出口食品中强调要加强对曲酸的检验，禁止使用曲酸作为食品添加剂。对于禁用物质，必须建立一个确证的方法。目前国内外尚无相关检测标准，国标GB/T23534-2009中仅有对曲酸含量的检测方法，其使用的分光光度法是筛选方法，无法满足日本对曲酸残留量检测的要求。因此，建立一种灵敏、简便、准确并适用于出口食品中曲酸残留量的液质联用检测方法迫在眉睫。
二、编制依据
本标准的编制遵循GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》的要求进行编写制订的。
三、标准制定过程
本标准起草单位在2010年4月收到认监委的任务下达文件后，立刻开始着手进行标准文本、编制说明和验证工作。
本标准起草人通过查询相关资料和文献，结合国内外文献中已有的检测基础，建立了食品中曲酸的检测方法。经实验研究验证后，方法的灵敏度、特异性和选择性均能满足相应的检测要求。
四、主要实验技术内容
1样品前处理条件的优化
1、提取
据文献报道，曲酸常用在水果蔬菜、禽肉类产品、酱及酱菜类、甲壳类水产品、面制品类、酱油等调味品、糖浆、饮料类多种复杂基质中，因此考虑到基质对曲酸检测的影响较大，我们需针对不同的基质进行分类提取。
1）固体样品
根据曲酸的溶解性，其较易溶于水以及亲水性较强的有机试剂如甲醇、乙腈等。因此分别选用单一溶剂提取液甲醇、乙腈、水以及常用的二元混合提取溶剂（甲醇-水，乙腈-水）对固体样品进行提取。实验表明：单一溶剂中乙腈的提取效率最高，甲醇次之，而二元混合提取溶剂的提取效率与乙腈提取无明显差别。但二元混合提取溶剂的后处理较为麻烦。由于动物源性食品以及部分植物源性食品脂肪含量较高，同时乙腈还是较好的蛋白沉淀剂，因此最终确定乙腈作为提取溶剂是较为合适的。对于水果蔬菜类含水量较多基质，为了后处理便于浓缩，还需进行脱水处理。
2）水性基质
酱油是水性基质中成份最为复杂的产品，它含有大量的盐、色素、短肽以及有机酸等大分子极性杂质。醋、酒等的成份次之。如果经一般的稀释过滤就直接进样，不仅过滤困难，而且大分子杂质极易堵塞色谱柱，对色谱柱造成难以修复的损伤。由于曲酸在水中的分配系数较大，因此采用有机溶剂提取的方式效果不佳。因此，我们换个角度，对这类产品中的杂质进行沉淀，去除干扰物质。亚铁氰化钾-乙酸锌作为一种经典的蛋白质及其它大分子极性物质沉淀剂，广