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东北七鳃鳗Liprotein的分子克隆、原核表达、抗体制备及组织分布研究的中期报告
本研究旨在开展东北七鳃鳗(Lampetramorii)主要血液蛋白Liprotein的分子克隆、原核表达、抗体制备及其在不同组织中的表达分布研究。截至目前，已完成了该项目的中期任务，下面将进行详细介绍。
1.分子克隆
以东北七鳃鳗肝脏cDNA为模板，设计了Liprotein的一对特异性引物，并进行了PCR扩增。扩增出了一个长度为990bp的Liprotein基因片段，并进行了测序。序列分析表明，该基因序列与其他七鳃鳗Liprotein基因具有高度同源性，为东北七鳃鳗Liprotein基因。
2.原核表达
将Liprotein基因片段克隆到原核表达载体pET28a中，转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。经SDS-PAGE和Westernblotting检测，获得了表达产物，表明Liprotein基因片段被成功表达。
3.抗体制备
将纯化得到的Liprotein蛋白用于SDS-PAGE和Westernblotting检测，证明其为重组Liprotein蛋白。随后，将其免疫小鼠，经过多次免疫、融合和筛选，获得了Liprotein的单克隆抗体。
4.组织分布研究
采用Westernblotting和免疫组化方法，对东北七鳃鳗不同组织中Liprotein的表达情况进行了研究。结果表明，Liprotein主要分布在肝脏和血液中，而在其他组织中表达较低。
综上所述，截至目前，已完成了东北七鳃鳗Liprotein的分子克隆、原核表达、抗体制备及其在不同组织中的表达分布研究。该研究为进一步探究东北七鳃鳗的生物学特性和免疫学机制奠定了基础。