λ-卡拉胶降解组分的分离纯化、抗氧化及免疫活性研究.pdf

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㈣／2009年／第33卷／第8期A一卡拉胶降解组分的分离纯化、抗氧化及免疫活性研究周革非，魏元臣，孔娜娜，王长海实验材料与仪器实验方法1．3仪器用离子交换纤维素色谱进行分离纯化，并探讨了其原料试剂粗多糖的分级与纯化(烟台大学海洋学院，山东烟台264005)卡拉胶(Carrageenan)又名角叉菜胶、鹿角藻胶，是从红藻中提取的一种高分子亲水性多糖。根据其半乳糖残基上硫酸酯基团的不同，可分为K一型、c-型、A一型、弘一型等7种最小重复结构单位。A一卡拉胶是一种高硫酸酯化的天然多糖资源，其降解产物A一卡拉胶寡糖的活性研究已得到充分的开展，如抗凝血、抗病毒、抗肿瘤等[1矗]。国内外的研究者从提取、结构、活性等方面对卡拉胶进行了研究[1’3]。但对微波降解的A一卡拉胶组分生物活性研究未见报道。由于微波降解可导致A一卡拉胶降解产物的不均一性，从而得到分子质量、硫酸基含量等不同的多糖组分，便于探讨多糖生物活性的作用机制。本工作对微波降解法得到的A一卡拉胶降解产物PC2[引，采体外抗氧化和免疫活性，以期通过对微波降解的A一卡拉胶组分的分离及相关活性的研究，以明确多糖组分的生理功能，为A一卡拉胶的进一步开发利用提供理论基础。1A一卡拉胶降解组分PC2是从青岛太平角沿海角叉菜(Chondruscrispus)中分离纯化、微波降解所得[3]。DEAE纤维素DE52，美国Whatman公司；硫代巴比妥酸(TBA)，上海试剂二厂；RPMll640培养液，美国HyClone公司，Milli-Q水配制，加10％小牛血清、双抗、HEPES，过滤除菌分装；小牛血清，美国HyClone公司，56℃灭活；氯化硝基四氮唑蓝(NBT)为上海前进试剂厂产品；酵母多糖A，3一(4，5一二甲基噻唑一2酰基)一2，5二苯基四氮唑溴盐(MTT或噻唑蓝)，Sigma公司产品；DMSO，上海生工生物工程有限公司，AMRESC0分装；其余试剂均为分析纯试剂及生化试剂。昆明种小鼠，雄性，质量32g，购自山东省实验动物中心。w13-9403A型荧光一紫外分析仪(紫外光源波长nm)，北京市六一仪器厂生产；Agi—lentll00型高效液相色谱仪，美国安捷伦科技有限公司；ELx-800酶联免疫检测仪，美国Bio—TekINC；C02培养箱，美国希尔顿公司产品；96孔细胞培养板，美国Coastar公司产品。2通过离子交换纤维素色谱对卡拉胶降解组分PC2进行分级。PC2溶于蒸馏水，加到以蒸馏水预先平衡好的DEAE-纤维素DE52柱(2．5上，通过分步洗脱得到不同的级分。首先以蒸馏水进行洗脱，然后依次用0．5、1．0、1．5、2．0NaCl溶液进行洗脱。洗脱液以苯酚一硫酸法检测，每一洗脱组分直到检测不到多糖成分后，再换下一浓度的洗脱液进行洗脱。收集每一级分的洗脱液，三氯乙酸法去除蛋白，过滤，透析，减压浓缩，最后冷冻干燥得到纯化的样品。摘要：采用离子交换纤维素色谱DE52柱对微波降解所得A一卡拉胶(PC2)进行分级，得到3个A一卡拉胶降解组分(CFl、CF2、CF3)。同时，通过光度法研究了CFl、CF2和CF3清除羟基自由基(·0H)、超氧阴离子(0f·)和H202的活性及体外免疫活性。结果表明，3个多糖组分均具有不同程度的清除自由基及促进淋巴细胞增殖的作用，其中，硫酸基含量高的CF3具有较好的抗氧化活性(CFI、CF2、CF3清除·0H、0i·和H2()2的IC5。值分别为：0．217、0．619、0．087子质量较小的CFl具有较好的体外免疫活性，说明^一卡拉胶的生物活性不仅与硫酸基含量有关，还与分子质量大小有关。关键词：A一卡拉胶；降解；抗氧化活性；分离纯化；体外免疫活性文献标识码：A文章编号：1000一3096(2009)08—0058—051．11．2struments2．1mol／Lg／L，0．166、0．214、0．090g／I。和0．602、1．060、0．261g／L)，而分中图分类号：Q949．2254、300、365In—cmX40cm)收稿日期：2008-10—16；修回日期：2009-02-24基金项目：山东省中青年科学家科研奖励基金资助项目(2008BS06012)；烟台市科学技术发展计划项目(2008GGA0020080410084458)作者简介：周革非(1968-)，女，山东烟台人，博士，副教授，研究方向：海洋生物活性物质，E-mail：[e-mail]，电话：[phone]；王长海，通信作者，男，博士，教授，研究方向为海洋生物化工，[e-mail]'l58
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研究报告R照3结果与分析H2Q诱发小鼠红细胞氧化溶血的测定嘲2．2理化性质测定2．2．2紫外光谱分析2．3红细胞