【文本】食品安全国家标准-食品中酵母β-葡聚糖的测定-征求意见稿.pdf

中华人民共和国国家标准

GB××××—××××

食品安全国家标准

食品中酵母β-葡聚糖的测定

（讨论稿）

201×2010--××-××-××发布发布201×2010-××06--01××实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国家市场监督管理总局
GB××××—××××

食品安全国家标准
食品中酵母β-葡聚糖的测定

1范围
本标准规定了调制乳、风味发酵乳、调制乳粉和婴幼儿配方乳粉中不溶性酵母β-葡聚糖含量的测
定方法。
本标准适用于调制乳、风味发酵乳、调制乳粉和婴幼儿配方乳粉中不溶性酵母β-葡聚糖的测定。
2原理
本方法利用蛋白酶和/或脂肪酶去除样品中的脂肪、蛋白质，然后通过离心将酵母β-葡聚糖进行
富集。富集后的酵母β-葡聚糖经氢氧化钾溶液凝胶化后，依次通过溶壁酶、β-(1,6)-葡聚糖酶、β-
(1,3)-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶酶解，最终水解为葡萄糖。葡萄糖在有氧条件下被葡萄糖氧化酶（GOD）
催化氧化，生成D-葡萄糖酸-δ-内脂和过氧化氢。过氧化氢被氧化物酶（POD）催化，与4-氨基安替比
林和对羟基苯甲酸反应生成红色醌亚胺（GODPOD法）。利用分光光度计测定葡萄糖的含量，再计算
得出样品中酵母β-葡聚糖的含量。
3试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。

3.1试剂

3.1.1不溶性酵母β-葡聚糖对照品，已知纯度，且纯度≥70%。
3.1.2无水葡萄糖，纯度≥99%
3.1.3碱性蛋白酶，酶活力≥240000U/g。
3.1.4中性蛋白酶，酶活力≥80000U/g。
3.1.5酸性蛋白酶，酶活力≥50000U/g。
3.1.6脂肪酶，酶活力≥20000U/g。
3.1.7乙二胺四乙酸四钠二水合物，C10H14N2Na4O8·2H2O。
3.1.8三羟甲基氨基甲烷（tris），C4H11NO3。
3.1.9冰醋酸，CH3COOH。
3.1.10无水乙酸钠，CH3COONa。
3.1.11氯化钠，NaCl。
3.1.12氢氧化钾，KOH。
3.1.13氢氧化钠，NaOH。
3.1.14盐酸，HCl。
3.1.15溶壁酶，酶活力≥200U/mg。
3.1.16β-(1,6)-葡聚糖酶，酶活力≥2U/mg。
3.1.17β-(1,3)-葡聚糖酶和葡萄糖苷酶混合酶，酶活力分别≥100U/mL和20U/mL。

3.2试剂配制

3.2.1葡萄糖标准溶液（2.0g/L）：称取0.20g（精确至0.001g）经过98℃～100℃干燥2h的葡萄糖
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（3.1.2），加水溶解并定容至100mL，摇匀。
3.2.2葡萄糖系列标准溶液：分别量取0.6mL、1.0mL、2.5mL、4.0mL和5.0mL葡萄糖标准溶液（3.2.1）
至10mL容量瓶中，加水定容并混匀。其葡萄糖浓度分别为0.12g/L、0.20g/L、0.50g/L、0.80
g/L、1.00g/L。
3.2.3蛋白酶混合溶液：等体积混合碱性蛋白酶（3.1.3）和中性蛋白酶（3.1.4），4℃保存。
3.2.4氢氧化钾溶液（2.0mol/L）：称取11.2g氢氧化钾（3.1.12），水充分溶解后，定容至100mL，混
匀后，4℃冷藏保存。
3.2.5氢氧化钠溶液（1.0mol/L）：称取4.0g氢氧化钠（3.1.13），水充分溶解后，定容至100mL，并
混匀。
3.2.6盐酸溶液（1.0mol/L）：量取9mL盐酸（3.1.14）至盛有80mL水的容量瓶中，充分混匀后，以
水定容并混匀。
3.2.7乙酸钠缓冲溶液A（0.2mol/L）：分别称取5.25g无水乙酸钠（3.1.10）和2.16g冰醋酸（3.1.9）
至400mL水中，氢氧化钠溶液（3.2.5）或冰醋酸（3.1.9）调节pH至5.0±0.05，水定容至500
mL，并混匀。
3.2.8乙酸钠缓冲溶液B（1.2mol/L）：分别称取4.96g无水乙酸钠（3.1.10）和32.32g冰醋酸（3.1.9）
至400mL水中，氢氧化钠溶液（3.2.5）或冰醋酸（3.1.9）调节pH至3.8±0.05，定容至500mL，
并混匀。
3.2.9缓冲溶液C（pH7.5）：溶解1.212g三羟甲基氨基甲烷（3.1.8）、1.169g氯化钠（3.1.11）以及
0.416g乙二胺四乙酸四钠二水合物（3.1.7）于90mL纯净水中。用盐酸溶液（3.2.6）或氢氧化
钠溶液（3.2.5）调节pH至7.5±0.05，最后水定容至100mL，并混匀。
3.2.10溶壁酶溶液（5u/μL）：称取适量溶壁酶至含有10%缓冲溶液C（3.2.9）中，使溶壁酶最终浓度
为5u/μL（-15℃条件下可