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人参叶和根cDNA文库构建及表达序列标签分析的综述报告 人参(Panaxginseng)是一种具有重要药用价值的中草药,其主要成分为人参皂苷。人参叶和根部是人参的重要药材部位,具有不同的药效成分。人参叶是人参植物中一种重要的中药材,其所含的有效成分同样具有很高的药理活性,被广泛应用于抗肿瘤、调节免疫功能、降血压、抗糖尿病等方面。与之相对应的,人参的根部则被广泛用于提取人参皂苷。 为进一步探讨人参叶和根部的药理成分,构建其cDNA文库并进行表达序列标签(EST)分析,是非常必要和重要的。本文就人参叶和根部的cDNA文库构建及EST分析进行综述。 一、文库构建 1.人参叶cDNA文库的构建 首先,从不同发育阶段的人参叶中分离出RNA,并通过反转录酶将mRNA转录成cDNA。然后,利用普通的cDNA库构建方法将cDNA文库嵌入载体中,最后通过转化大肠杆菌中完成文库构建。构建完成后,人参叶的cDNA文库被用于克隆、扩增和纯化含有大量感兴趣蛋白的cDNA片段。 2.人参根部cDNA文库的构建 人参根部cDNA文库的构建流程和人参叶的构建流程相似。也是先从不同生长阶段的人参根部中分离RNA,并通过反转录酶将mRNA转录成cDNA,接着将其嵌入载体中,并通过转化大肠杆菌中完成构建。 二、EST分析 1.人参叶EST分析 一般情况下,利用cDNA文库进行EST分析需要进行DNA测序,然后将所得的序列与数据库中的序列比对,进而分析出含有感兴趣蛋白序列的cDNA片段。但是由于人参基因组复杂性较高,从人参叶中分离得到的RNA中所含有的mRNA数量很少,测序所得到的EST数量也相应较低。 因此,在人参叶的EST分析中,往往采用先创建EST的序列集,然后在此基础上进行分析。利用此方法,可以收集到更多的短序列,并从中挑选出保守的、具有与其他物种相似或相同的序列片段,进而标识出所含有的蛋白质。 2.人参根部EST分析 人参根部的EST分析相对人参叶而言要容易一些,这是因为人参根部含有大量的叶绿体和植物基因组DNA,从而意味着从人参根部中分离出来的RNA拥有比从人参叶中分离出来的RNA更多的mRNA。此外,人参根部的基因组也结构与其他植物的基因组较为相似。 基于上述原因,人参根部的EST分析可以采用传统的DNA测序方法进行。通过测序所得的序列就能快速地标识和鉴定出人参根部中所含有的蛋白质,从而更好地理解人参根部的药理成分。 结论: 本文对人参叶和根部cDNA文库的构建及EST分析进行了综述。因为人参基因组复杂性较高,因此文库构建和EST分析需要根据具体情况进行调整。对人参叶和根部的cDNA文库的构建和EST分析的进一步研究,将有助于深入了解人参药用价值的科学基础,也将为人参的豆科物种提供新的研究思路和技术手段。