基于重组载体蛋白的霍乱‑轮状病毒联合疫苗及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107080841A(43)申请公布日2017.08.22(21)申请号201710258940.4A61K39/385(2006.01)(22)申请日2017.04.19A61K39/15(2006.01)A61P31/04(2006.01)(66)本国优先权数据A61P31/14(2006.01)201710200974.82017.03.30CN(71)申请人武汉博沃生物科技有限公司地址430075湖北省武汉市东湖高新区高新大道858号生物医药产业园中小企业园A9-2栋(72)发明人史晋马涛王文灏李津(74)专利代理机构上海精晟知识产权代理有限公司31253代理人熊娴冯子玲(51)Int.Cl.A61K39/295(2006.01)权利要求书1页说明书19页A61K39/106(2006.01)序列表4页附图2页(54)发明名称基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗及其制备方法，联合疫苗包括：a.霍乱疫苗，包括：大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)蛋白及霍乱弧菌肠毒素B亚单位蛋白(CTB)重组蛋白，以及霍乱抗原；b.轮状病毒疫苗；其中，轮状病毒疫苗与霍乱疫苗临用混悬。本发明提供的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗及其制备方法采用的载体蛋白不仅具有良好的免疫原性，更具有良好的免疫佐剂效果，可以引起良好的黏膜免疫效果，可以作为多种抗原的优良载体，具有广泛的应用前景。CN107080841ACN107080841A权利要求书1/1页1.一种基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于，所述联合疫苗包括：a.霍乱疫苗，包括：霍乱抗原及抗原载体，其中霍乱抗原与抗原载体偶联，抗原载体为重组蛋白载体，由大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)蛋白及霍乱弧菌肠毒素B亚单位蛋白(CTB)基因重组获得重组载体蛋白；b.轮状病毒疫苗；轮状病毒疫苗与霍乱疫苗临用混悬。2.根据权利要求1所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于，LTB核酸序列与CTB核酸序列通过引物序列桥接，构建的LTB-CTB核酸序列如序列表SEQIDNO：5所示，编码的载体蛋白序列如序列表SEQIDNO：6所示。3.根据权利要求1所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于：CTB核酸序列选自O139群霍乱全基因序列的CDS区。4.根据权利要求1所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于：编码LTB蛋白的核苷酸序列如序列表SEQIDNO：1所示，其编码的氨基酸序列如序列表SEQIDNO：2所示。5.根据权利要求4所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于：编码CTB蛋白的核苷酸序列如序列表SEQIDNO：3所示，其编码的氨基酸序列如序列表SEQIDNO：4所示。6.根据权利要求1所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于：霍乱抗原为蛋白抗原和/或多糖抗原。7.根据权利要求6所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于：霍乱抗原为霍乱弧菌O139群霍乱荚膜多糖。8.根据权利要求1所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗，其特征在于：轮状病毒疫苗包括轮状病毒灭活疫苗或轮状病毒减活疫苗。9.根据权利要求1所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗及其制备方法，其特征在于，步骤包括：S1.根据LTB和CTB的CDS区核酸序列，设计两对引物，构建pET28a-LTB-CTB质粒，PCR扩增后，通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切，凝胶回收LTB-CTB片段和表达载体pET28a；S2.连接转化大肠杆菌DH5α菌株，筛选阳性克隆后进行单克隆扩增，IPTG诱导后鉴定；S3.将霍乱抗原与重组载体蛋白进行偶联，偶联后检测结合产物。10.根据权利要求9所述的基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗及其制备方法，其特征在于，S3具体为：将霍乱多糖与重组载体蛋白进行偶联，多糖与载体蛋白按质量比为0.5～4：1，偶联后检测结合产物。2CN107080841A说明书1/19页基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种基于重组载体蛋白的霍乱-轮状病毒联合疫苗及其制备方法，属于生物医药领域。背景技术[0002]一、病原微生物与疫苗[0003]能引起人体或动物体发生传染病的微生物，称为病原微生物或致病微生物。传染是指病原微生物侵入机体后，在一定的部位生长、繁殖，并引起一系列病理生理的过程。当病原微生物侵入机体后，病原微生物与机体互相作用，互相改变对方的活性与功能，因此能否引起传染病，一方面取决于病原