预览加载中,请您耐心等待几秒...
1/10
2/10
3/10
4/10
5/10
6/10
7/10
8/10
9/10
10/10

亲,该文档总共23页,到这已经超出免费预览范围,如果喜欢就直接下载吧~

如果您无法下载资料,请参考说明:

1、部分资料下载需要金币,请确保您的账户上有足够的金币

2、已购买过的文档,再次下载不重复扣费

3、资料包下载后请先用软件解压,在使用对应软件打开

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107164562A(43)申请公布日2017.09.15(21)申请号201710501659.9(22)申请日2017.06.27(71)申请人华东医院地址200040上海市静安区延安西路221号(72)发明人张艳梅赵虎吴勇陈敏杨丽华保志军李敏杨长青李冬陈洁(74)专利代理机构上海海颂知识产权代理事务所(普通合伙)31258代理人任益(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书2页说明书11页序列表7页附图2页(54)发明名称腹泻相关病毒多重基因检测体系及其试剂盒和应用(57)摘要本发明涉及一种腹泻相关病毒多重基因检测体系及其试剂盒和应用。检测体系共有9对引物,其中包括6对腹泻病毒、2对人基因组内参和1对系统质控内参引物。腹泻病原体分别针对人星状病毒、诺如病毒II、人肠道腺病毒和轮状病毒等。本发明的腹泻病原体多重检测体系及其试剂盒不需要采用常规检测,可在同一反应体系内直接对粪便样本进行多种腹泻相关病毒的同步检测和分析,弥补了常规检测方法通量低和耗时长等缺点,第一时间为临床提供全面、精准、低成本的病原学诊断,为个体化用药和精准医疗提供重要参考。CN107164562ACN107164562A权利要求书1/2页1.一种腹泻相关病毒多重基因检测体系,其特征在于:包括分别针对人星状病毒、诺如病毒II、人肠道腺病毒、轮状病毒A、轮状病毒B和轮状病毒C进行检测的正反向PCR扩增引物。2.根据权利要求1所述的腹泻相关病毒多重基因检测体系,其特征在于:针对人星状病毒的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.27所示,对应人星状病毒的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.28所示;针对诺如病毒II的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.29所示,针对诺如病毒II的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.30所示;针对人肠道腺病毒的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.31所示,以及针对人肠道腺病毒的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.32所示;针对轮状病毒A的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.33所示,以及针对轮状病毒A的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.34所示;针对轮状病毒B的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.35所示,以及针对轮状病毒B的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.36所示;针对轮状病毒C的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.37所示,以及针对轮状病毒C的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.38所示。3.根据权利要求2所述的腹泻病原体多重基因检测体系,其特征在于:还包括针对人RNA内参、人DNA内参、系统质控内参进行检测的正反向PCR扩增引物;所述人RNA内参是B2M,人DNA内参是RNaseP,系统质控内参是含有卡那霉素抗性基因的质粒;针对人RNA内参的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.39所示,以及针对人RNA内参的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.40所示;针对人DNA内参的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.41所示,以及针对人DNA内参的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.42所示;针对系统质控内参的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.43所示,以及针对系统质控内参的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.44所示。4.根据权利要求2所述的腹泻病原体多重基因检测体系,其特征在于:所述针对轮状病毒B的正向引物在检测体系中的终浓度均为200nM;所述针对诺如病毒II、轮状病毒C的正向引物在检测体系中的终浓度均为100nM,所述针对人星状病毒的正向引物在检测体系中的终浓度均为300nM,所述针对人肠道腺病毒的正向引物在检测体系中的终浓度均为450nM,所述针对轮状病毒A的正向引物在检测体系中的终浓度均为400nM;所述针对人肠道腺病毒、轮状病毒B、轮状病毒C的反向引物在检测体系中的终浓度均为100nM,所述针对人星状病毒、诺如病毒II的反向引物在检测体系中的终浓度均为400nM,所述针对轮状病毒A的反向引物在检测体系中的终浓度均为450nM;针对人RNA内参、人DNA内参、和系统质控内参的正反向引物在检测体系中的终浓度均为1μM。5.根据权利要求1至4中任一项所述的腹泻相关病毒多重基因检测体系,其特征在于:还包括PCR缓冲液,MgCl2溶液,dNTPs,以及热启动DNA聚合酶和逆转录酶混合液。6.根据权利要求1至4中任一项所述的腹泻相关病毒多重基因检测体系,其特征在于:所述荧光标记为CY5或CY3或FAM。2CN107164562A权利要求书2/2页7.根据权利要求1至4中任一项所述的腹泻相关病毒多重基因检测体系,其特征在于:还包