腹泻病原体多重基因检测体系及其试剂盒和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107245531A(43)申请公布日2017.10.13(21)申请号201710503230.3(22)申请日2017.06.27(71)申请人华东医院地址200040上海市静安区延安西路221号(72)发明人张艳梅赵虎保志军李敏杨长青陈敏杨丽华李冬吴勇陈洁戴兆云王诗雯杨峰张景皓赵付菊方毅(74)专利代理机构上海海颂知识产权代理事务所(普通合伙)31258代理人任益(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12Q1/10(2006.01)权利要求书3页说明书12页序列表7页附图2页(54)发明名称腹泻病原体多重基因检测体系及其试剂盒和应用(57)摘要本发明涉及一种腹泻病原体多重基因检测体系及其试剂盒和应用。检测体系共有22对引物，其中包括19对腹泻病原体、2对人基因组内参和1对系统质控内参引物。腹泻病原体分别针对空肠弯曲菌、志贺菌、艰难梭菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠产毒性大肠埃希菌、大肠埃希菌O157、弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、人星状病毒、诺如病毒II、人肠道腺病毒、轮状病毒等。本发明的腹泻病原体多重检测体系及其试剂盒不需要采用常规培养等步骤，可在同一反应体系内直接对粪便样本进行多种腹泻病原体的同步检测和分析，弥补了常规检测方法通量低、耗时长和检出率低等缺点，第一时间为临床提供全面、精准、低成本的病原学诊断，为个体化用药和精准医疗提供重要参考。CN107245531ACN107245531A权利要求书1/3页1.一种腹泻病原体多重基因检测体系，其特征在于：包括分别针对空肠弯曲菌、志贺菌、艰难梭菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠产毒性大肠埃希菌、肠出血性大肠埃希菌、肠致病性大肠埃希菌、肠黏附性大肠埃希菌、肠侵袭性大肠埃希菌、大肠埃希菌O157、弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、人星状病毒、诺如病毒II、人肠道腺病毒、轮状病毒A、轮状病毒B和轮状病毒C进行检测的正反向PCR扩增引物。2.根据权利要求1所述的腹泻病原体多重基因检测体系，其特征在于：针对空肠弯曲菌的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，针对空肠弯曲菌的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；针对志贺菌的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示，针对志贺菌的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示；针对艰难梭菌的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.5所示，针对艰难梭菌的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.6所示；针对肠炎沙门菌的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.7所示，针对肠炎沙门菌的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.8所示；针对鼠伤寒沙门菌的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.9所示，针对鼠伤寒沙门菌的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.10所示；针对肠产毒性大肠埃希菌的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.11所示，针对肠产毒性大肠埃希菌的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.12所示；针对肠出血性大肠埃希菌的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.13所示，针对肠出血性大肠埃希菌的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.14所示；针对肠致病性大肠埃希菌的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.15所示，针对肠致病性大肠埃希菌的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.16所示；针对肠黏附性大肠埃希菌的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.17所示，针对肠黏附性大肠埃希菌的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.18所示；针对肠侵袭性大肠埃希菌的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.19所示，针对肠侵袭性大肠埃希菌的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.20所示；针对弧菌的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.21所示，对应弧菌的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.22所示；针对小肠结肠炎耶尔森菌的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.23所示，对应小肠结肠炎耶尔森菌反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.24所示；针对大肠埃希菌O157的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.25所示，对应人大肠埃希菌O157的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.26所示；针对人星状病毒的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.27所示，对应人星状病毒的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.28所示；针对诺如病毒II的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.29所示，针对诺如病毒II的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.30所示；针对人肠道腺病毒的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.31所示，以及针对人肠道腺病毒的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.32所示；针对轮状病毒A的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.33所示，以及针