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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107502681A(43)申请公布日2017.12.22(21)申请号201710945356.6(22)申请日2017.10.12(71)申请人中华人民共和国南通出入境检验检疫局地址226000江苏省南通市崇川路102号(72)发明人陈峰陈琳徐聪灵蔡丽萍唐晓宇吴尔翔(74)专利代理机构南京艾普利德知识产权代理事务所(特殊普通合伙)32297代理人张铂(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表2页附图5页(54)发明名称一种A组轮状病毒快速实时荧光RT-PCR检测试剂盒(57)摘要本发明公开了一种A组轮状病毒快速实时荧光RT-PCR检测试剂盒,包括扩增引物:正向引物:5’-gttgatgctcaagatggagt-3’和反向引物:5’-acttcattgtaatcatattgaatacc-3’,还包括特异性荧光探针:5'-X-cagcaacaactgcagcttcaaaagaagtgt-Y-3'。本发明所述的试剂盒能够满足针对A组轮状病毒检测中的时效性要求,通过对反应体系中引物、探针、反应条件的设计,并使用了耐热DNA快速聚合酶,结合一步法荧光RT-PCR技术,达到快速、实时、定量检测A组轮状病毒的目的,灵敏度可达到102PFU/ml。CN107502681ACN107502681A权利要求书1/1页1.一种A组轮状病毒快速实时荧光RT-PCR检测试剂盒,其特征在于包括扩增引物和特异性荧光探针,所述扩增引物和特异性荧光探针的序列如下所示:正向引物:5’-gttgatgctcaagatggagt-3’,SEQIDNO:1;反向引物:5’-acttcattgtaatcatattgaatacc-3’,SEQIDNO:2;特异性荧光探针:5'-X-cagcaacaactgcagcttcaaaagaagtgt-Y-3',SEQIDNO:3,其中X表示荧光发生基团,Y表示荧光淬灭基团。2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于所述荧光发生基团为6-FAMamidite、HEX或Cy5,所述荧光淬灭基团为BHQ1。3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于正向引物:反向引物:特异性荧光探针的摩尔比为2:2:1。4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于所述试剂盒包括快速RT-PCR反应液、阴性质控品和阳性质控品。5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于所述快速RT-PCR反应液包括RT-PCR缓冲液、快速RT-PCR反应酶系、正向引物、反向引物、寡核苷酸探针、DEPC水。6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于所述RT-PCR缓冲液包含0.1mmol/LdNTPs、pH8.0,10mmol/LTris-HCl、150mmol/LKCl、2.0mmol/LMgCl2。7.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于所述快速RT-PCR反应酶系包含逆转录酶mMLV、耐热DNA快速聚合酶和RNA酶抑制剂。8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于所述逆转录酶用量为40U/反应、耐热DNA快速聚合酶用量为2.5U/反应、RNA酶抑制剂用量为20U/反应。9.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于所述试剂盒进行PCR扩增的反应条件为:50℃逆转录5min,1个循环;95℃8s,1个循环;最后95℃7s,55~60℃14s,40个循环。10.据权利要求1-9任一项所述试剂盒在制备A组轮状病毒的检测试剂中的用途。2CN107502681A说明书1/8页一种A组轮状病毒快速实时荧光RT-PCR检测试剂盒技术领域[0001]本发明涉及分子诊断技术领域,具体涉及一种A组轮状病毒快速实时荧光RT-PCR检测试剂盒。背景技术[0002]轮状病毒是病毒性肠胃炎中最常见的一种病原体。1973年,澳大利亚学者Bishop等在急性非细菌性肠胃炎儿童十二指肠粘膜的超薄切片中首次发现,1974年将之命名为轮状病毒。(WhiteGB,AshtonCI,RobertsC,ParryHE.1974.Letter:"Rotavirus"ingastroenteritis.Lancet.2(7882):726;BrydenAS,DaviesHA,HadleyRE,FlewettTH..1975.RotavirusenteritisintheWestMidlandsduring1974.Lancet.2(7928):241-3.)这种病原能引发接种动物发生呼吸道感染,并可自感染动物体内分离。[0003]轮状病毒属呼肠孤病毒科,为球型,有宽壳盖、短幅和薄边的双链RNA病毒。平均直径70nm左右,病毒体