实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的效果分析.docx

实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的效果分析（四川省阿坝藏族羌族自治州疾病预防控制中心四川阿坝624000）【摘要】目的：探讨实时荧光（RT-PCR）法快速检测流感病毒在临床中的应用效果，为今后的流行病学监测提供思路。方法：以我中心2014年1月至2014年12月期间采集的1355份流感样病例（ILI）及暴发疫点现患病例的咽拭子标本作为本组研究的观察对象，采用实时荧光RT-PCR方法对流感病毒核酸进行检测分型。结果：本组1355份咽拭子标本中共检测出流感病毒核酸阳性573份，总阳性率为42.29%；其中甲型H1N1流感352份，B型76份，季节性流感H1亚型21份，季节性流感H3亚型124份。结论：实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的特异性与灵敏度均较高，而且操作方便，效率高，可以作为公共卫生应急疫情的实验室快速诊断方法。【关键词】实时荧光RT-PCR法；流感病毒；检测R446A2095-1752（2015）21-0328-02流行性感冒（简称流感）是由A、B、C三型流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其临床症状缺乏特异性，与普通感冒非常相似，其中A、B型的抗原变异大，危害性较强，而且A型流感病毒又分为众多亚型[1]，因此临床诊断难度非常大。本文中将探讨实时荧光（RT-PCR）法快速检测流感病毒在临床中的应用效果，为今后的流行病学监测提供思路。1.资料与方法1.1临床资料以我中心2014年1月至2014年12月期间采集的1355份流感样病例（ILI）及暴发疫点现患病例的咽拭子标本作为本组研究的观察对象；所有患者均伴有发热（体温＞38℃）、咳嗽及咽痛症状中的一种[2]；所有标本均在4～8℃条件下保存，于48h内送至实验室待检。1.2方法1.2.1检测设备与试剂检测设备采用KINGFISHER核酸提取仪（Thermo公司）、罗氏2.0荧光定量PCR仪（罗氏公司）；病毒核酸提取试剂盒（Magmaxtm-96ViratRNAIsolationKit为ambion公司）、流感病毒核酸检测试剂（北京金豪制药股份有限公司）；所有试剂均在有效期内，操作严格按照试剂说明书进行。1.2.2检查方法采用实时荧光RT-PCR法对本组所有样本进行流感病毒核酸检测分型，每次试验均设置阳性对照和阴性对照，保证Ct值符合试剂说明书的要求[3]。2.结果本组1355份咽拭子标本中共检测出流感病毒核酸阳性573份，总阳性率为42.29%；其中甲型H1N1流感352份，占流感阳性标本总数的61.43%；B型76份，占流感阳性标本总数的13.26%；季节性流感H1亚型21份，占流感阳性标本总数的3.66%；季节性流感H3亚型124份，占流感阳性标本总数的21.64%。表1本组实时荧光RT-PCR检测情况分析组别检测样本数阳性率（n/%）病毒型别甲型H1N1B型季节性流感H1季节性流感H30～岁组419/21.9552025～岁组135108/80731511915～岁组237153/64.596246331225～岁组11863/53.394231242160～岁组4219/45.2375343.讨论流感具有起病急，传染性强，传播快等特点，危害极大。现阶段临床中对于流感病毒的检测主要通过采集患者的咽拭子进行细胞培养的方式（接种鸡胚与狗肾脏传代细胞（MDCK）进行病毒的分离、定型）对病毒类型进行判断[4-5]。而细胞培养所需的时间较长，常用流感病毒治疗药物的最佳治疗时期是在48h内，因此不利于早期治疗的效果，对暴发疫情的预防效果较差。通过本组研究可以发现，RT-PCR法快速检测流感病毒的特异性与敏感度均较高，而且具有良好的重复性和稳定性，可在3h内提供检测结果。另外，5～岁组的样本阳性率最高，因此应作为流感防控的重点对象。综上所述，实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的特异性与灵敏度均较高，而且操作方便，效率高，可以作为公共卫生应急疫情的实验室快速诊断方法。【参考文献】[1]张萍，韩文清，宫连凤等．实时荧光RT-PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的应用[J]．中国病原生物学杂志，2011，1（6）：145-148．[2]连金泉，张华伟，庆慧在．实时荧光PCR法、胶体金快速检测法及病毒分离培养法在甲型流感病毒检测中的临床应用分析[J]．中国医疗前沿，2013，8（20）：69-70．[3]JanieeK，LouieHG，ErieaB，etal．Rapidinfluenzaantigentestfordiagnosisofpandemie（HINI）2009[J]．EmergInfectDis，2010，16（5）：824-826．[4]唐保晖，黄丽华，韦晓仙．实时荧光RT-PCR法快速检测流感病毒的应用研究[J]．中国热带医学，2013，13（01）：22-24．