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本发明涉及兽用生物制品技术领域,具体公开了一种8a型禽腺病毒毒株、灭活疫苗及其制备方法和应用。该毒株属于I群E种8a型,命名为DK02株,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCCNO:V202170。实验表明,本发明DK02株适应于悬浮LMH细胞(鸡肝癌细胞)且产毒量高,致病力强,免疫原性好。本发明还提供的DK02株在制备预防包涵体肝炎的疫苗上的应用。本发明提供一种禽I群腺病毒血清8a型的灭活疫苗,用于预防包涵体肝炎。免疫实验鸡后,能够很好地预防近年来由禽I群8a型腺病毒引起的鸡“包涵体肝炎”,攻毒保护率高,安全性高,抗体产生快,效力稳定。