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BLyS突变体的构建、表达、纯化和功能鉴定的中期报告
BLyS（激活B淋巴细胞刺激因子）是一种细胞因子，对B淋巴细胞的生长、分化和存活都有影响。目前已知BLyS有三种受体，分别为TACI、BAFF-R和BCMA。本项目旨在构建BLyS突变体，通过对特定受体的亲和力增强或减弱，探究BLyS与受体之间的相互作用机制。
在之前的工作中，我们制备了三种BLyS突变体：BLyS-Ig（增加与TACI和BAFF-R的亲和力）、BLyS-mut1（增加与TACI的亲和力）、BLyS-mut2（减少与BCMA的亲和力）。接下来，我们进行了表达和纯化实验，并初步进行了功能鉴定。
首先，我们在CHO-S细胞上表达了这三种BLyS突变体，经过SDS-PAGE和Westernblot证实了其表达。然后，我们利用His-tag进行纯化，通过Ni-NTA柱和SephacrylS-200HR柱获得了高纯度的BLyS-Ig、BLyS-mut1和BLyS-mut2。
接下来，我们进行了功能鉴定。首先，采用MTT法检测对B细胞的增殖作用，结果表明BLyS-Ig、BLyS-mut1和BLyS-mut2对B细胞的增殖能力均有明显影响，且BLyS-Ig对B细胞的增殖作用最强。然后，我们对BLyS突变体与其受体的结合亲和力进行了ELISA实验，结果表明BLyS-Ig对TACI和BAFF-R的亲和力均有明显增强，BLyS-mut1对TACI的亲和力也有增强，而BLyS-mut2对BCMA的亲和力有显著减弱。
综上所述，我们成功地构建了三种BLyS突变体，并初步进行了表达、纯化和功能鉴定。下一步，我们将进一步探究BLyS构象、突变位点和受体结合的关系，深入研究其作用机制。