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分子伴侣表达载体构建及TEV蛋白酶突变体的功能分析的中期报告
本研究旨在构建分子伴侣表达载体并利用TEV蛋白酶突变体分析其功能。目前已完成构建分子伴侣表达载体的实验，并初步验证载体的功能。
具体实验步骤如下：
1.设计分子伴侣表达载体的引物，引物序列如下：
Forwardprimer:5'-ATGGAGACGTGATGGTTAAC-3'
Reverseprimer:5'-CTATTTACAGGGTCAGTTTG-3'
2.通过PCR扩增出分子伴侣基因，并进行酶切和凝胶电泳，结果显示目标DNA片段大小为1.2kb，符合预期。
3.将PCR产物连接到pGEX-4T-1载体上，构建出重组融合蛋白表达载体。
4.将载体转化至大肠杆菌DH5α中，通过PCR和酶切检测，确认构建出的重组融合蛋白表达载体正确。
5.在IPTG诱导下，利用重组融合蛋白表达载体成功过表达出目标蛋白，通过SDS-PAGE电泳检测，预计大小约为45kDa。
6.采用蛋白亲和纯化技术，纯化出目标蛋白，并利用Westernblot验证纯化蛋白的正确性。
下一步将进行TEV蛋白酶突变体的构建，并与构建出的分子伴侣表达载体进行相互作用实验，进一步分析其功能。