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BAFF及其受体融合蛋白的构建表达纯化与功能鉴定的中期报告
本研究旨在构建、表达纯化并进行功能鉴定BAFF及其受体融合蛋白。截至目前，已完成如下工作：
1.已成功构建BAFF及其受体（BAFF-R、TACI和BCMA）的融合蛋白表达质粒。将融合蛋白的序列设计并合成后，克隆到pET28a(+)载体中，得到BAFF-Fc/pET28a(+),BAFF-R-Fc/pET28a(+),TACI-Fc/pET28a(+)和BCMA-Fc/pET28a(+)构建表达质粒。
2.进行了大肠杆菌BL21(DE3)的转型和表达。将构建好的表达质粒转化进BL21(DE3)细胞中进行表达，同时控制感受态发酵过程中的菌体生长和表达质粒的转录表达。
3.进行了脱附柱层析纯化。收集到大肠杆菌经过超声、破细胞后的上清液，以蛋白A树脂为毛细管柱，对表达的融合蛋白进行纯化。
4.已经对表达纯化的BAFF-Fc/pET28a(+)、BAFF-R-Fc/pET28a(+)、TACI-Fc/pET28a(+)和BCMA-Fc/pET28a(+)进行了Westernblot检测。结果表明，检测出的蛋白质大约在70kDa左右，符合预期的分子量。
5.接下来的工作计划是进一步对纯化蛋白的功能进行鉴定。首先，将蛋白质进行定量，然后进行ELISA等生物学实验，利用分子生物学、生化学、免疫学等多方面的手段，探究融合蛋白的生物学功能。