检测植物病原性轮枝菌的特异引物对、探针和试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108707688A(43)申请公布日2018.10.26(21)申请号201810566515.6(22)申请日2018.06.05(71)申请人宁波检验检疫科学技术研究院地址315000浙江省宁波市海曙区马园路9号(72)发明人段维军郭立新段丽君陈先锋(74)专利代理机构杭州云睿专利代理事务所(普通合伙)33254代理人张骁敏(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/04(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12R1/645(2006.01)权利要求书2页说明书8页序列表1页附图4页(54)发明名称检测植物病原性轮枝菌的特异引物对、探针和试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了一种检测植物病原性轮枝菌的特异引物对、探针和试剂盒及其应用。本发明首先提供了一种特异引物对，由序列表的序列1所表示的引物VF和序列表的序列2所表示的引物VR组成。本发明还提供一种引物探针组，包括所述特异引物对和探针，所述探针由序列表的序列3所表示。本发明还提供所述特异引物对或所述引物探针组的应用，为如下(b1)、(b2)、(b3)或(b4)：(b1)鉴定植物病原性轮枝菌；(b2)制备用于鉴定植物病原性轮枝菌的试剂盒；(b3)检测待测样本是否含有植物病原性轮枝菌；(b4)制备用于检测待测样本是否含有植物病原性轮枝菌的试剂盒。CN108707688ACN108707688A权利要求书1/2页1.一种特异引物对，其特征在于由引物VF和引物VR组成；所述引物VF为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物VR为如下(a3)或(a4)：(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子。2.一种引物探针组，其特征在于包括权利要求1所述特异引物对和探针VP：所述探针VP为如下(c1)或(c2)：(c1)序列表的序列3；(c2)与序列3相比进行了一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加。3.根据权利要求2所述引物探针组，其特征在于所述探针VP的一个末端具有荧光报告基团，另一个末端具有荧光淬灭基团。4.权利要求1所述特异引物对或权利要求2或3所述引物探针组的应用，为如下(b1)、(b2)、(b3)或(b4)：(b1)鉴定植物病原性轮枝菌；(b2)制备用于鉴定植物病原性轮枝菌的试剂盒；(b3)检测待测样本是否含有植物病原性轮枝菌；(b4)制备用于检测待测样本是否含有植物病原性轮枝菌的试剂盒。5.一种试剂盒，其特征在于包括权利要求1所述特异引物对或权利要求2或3所述引物探针组；所述试剂盒的功能为如下(b1)、(b3)：(b1)鉴定植物病原性轮枝菌；(b3)检测待测样本是否含有植物病原性轮枝菌。6.一种鉴定待测菌是否为植物病原性轮枝菌的方法，其特征在于包括如下步骤：以待测菌的基因组DNA为模板，采用权利要求2或3所述引物探针组进行实时荧光PCR并检测荧光信号，如果荧光信号显示符合阳性扩增曲线，则待测菌为或候选为植物病原性轮枝菌；如果荧光信号显示不符合阳性扩增曲线，则待测菌为或候选为非植物病原性轮枝菌。7.一种鉴定待测菌是否为植物病原性轮枝菌的方法，其特征在于包括如下步骤：以待测菌的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述特异引物对进行PCR扩增，如果产生特异扩增产物，则待测菌为或候选为植物病原性轮枝菌；如果不产生特异扩增产物，则待测菌为或候选为非植物病原性轮枝菌。8.一种检测待测样本是否含有植物病原性轮枝菌的方法，其特征在于包括如下步骤：以待测样本的总DNA为模板，采用权利要求2或3所述引物探针组进行实时荧光PCR并检测荧光信号，如果荧光信号显示符合阳性扩增曲线，则待测样本含有或疑似含有植物病原性轮枝菌；如果荧光信号显示不符合阳性扩增曲线，则待测样本不含有或疑似不含植物病原性轮枝菌。9.一种检测待测样本是否含有植物病原性轮枝菌的方法，其特征在于包括如下步骤：2CN108707688A权利要求书2/2页以待测样本的总DNA为模板，采用权利要求1所述特异引物对进行PCR扩增，如果产生特异扩增产物，则待测样本含有或疑似含有植物病原性轮枝菌；如果不产生特异扩增产物，则待测菌不含有或疑似不含有植物病原性轮枝菌。10.一种检测待测样本是否含有植物病原性轮枝菌的方法，其特征在于包括如下步骤：检测待测样本的总DNA中是否具有权利要求1所述特异引物对的靶序列，如果具有所述靶序列，待测样本含有或疑似含有植物病原性轮枝菌；如果不具有所述靶序列，待测菌不含