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乙肝核心抗原原核表达与纯化的初步研究的中期报告 本实验的目的是对乙肝病毒核心抗原进行原核表达和纯化,为进一步研究该抗原的结构和功能提供基础。下面是实验的中期报告: 1.购买了E.coliBL21(DE3)菌株和pET28a表达载体,使用PCR扩增了乙肝病毒核心抗原基因片段并构建了表达载体。 2.进行了原核表达试验,结果显示获得了大量的表达产物。利用SDS-PAGE电泳鉴定产物在37℃温度下表达6小时时分子量为21kDa,与目标蛋白分子量相符。 3.进行了Ni2+亲和层析柱纯化,采用梯度洗脱方法得到了高纯度的乙肝病毒核心抗原。利用SDS-PAGE和Westernblot检测表明,得到的蛋白分子量为21kDa,同时具有乙肝病毒核心抗原的免疫反应性。 4.进行了ELISA检测,结果表明纯化后的乙肝病毒核心抗原具有高水平的抗原性。 5.初步进行了融合蛋白结构的预测和模拟,结果显示获得的乙肝病毒核心抗原融合蛋白结构与已有的相关文献报道的结构相似。 综上所述,本实验成功地构建了原核表达系统,表达并纯化了具有高纯度和高抗原性的乙肝病毒核心抗原,为后续的结构和功能研究奠定了基础。