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人Cu,ZnSOD在毕赤酵母中克隆表达的研究的中期报告 人Cu,ZnSOD是一种重要的抗氧化酶,在细胞中扮演着保护细胞免受氧化应激损伤的重要作用。为了研究人Cu,ZnSOD在毕赤酵母中的表达和活性,我们在研究中采用了克隆表达的方法。 首先,我们利用PCR技术从人体细胞中克隆了人Cu,ZnSOD基因,并将其插入到毕赤酵母表达载体pYES2中。随后,将重组质粒转化到毕赤酵母菌株中,并通过筛选获得了表达人Cu,ZnSOD的菌株。 为了检测表达的人Cu,ZnSOD的蛋白质,我们利用SDS-PAGE和Westernblotting技术进行了检测。结果表明,我们成功地表达了人Cu,ZnSOD的蛋白质,并且蛋白质分子量与预期大小相符合。同时,我们还测定了表达蛋白的活性,结果显示表达的人Cu,ZnSOD具有一定的抗氧化活性。 除此之外,我们还对表达蛋白进行了部分性质的研究,包括温度和pH值对酶活性的影响等。结果表明,酶活性在25-37℃之间随温度升高而增大,并在酸性条件下酶活性最高。 综上所述,我们成功地利用毕赤酵母为表达体系,表达和纯化了人Cu,ZnSOD,并进一步对其活性和性质进行了初步研究,为深入了解该酶的工作机制奠定了基础。