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人β-防御素-3在毕赤酵母中的分泌表达及活性研究的中期报告
人β-防御素-3（hBD-3）是一种人体天然免疫系统中的重要小分子抗菌肽，在抗菌、抗病毒、抗真菌等方面具有广泛的作用。为了得到足量的hBD-3供研究使用，本次实验旨在将hBD-3基因克隆到毕赤酵母中进行高效的分泌表达，并检测其功能性活性。
首先，本实验从人体单核细胞中提取RNA，利用RT-PCR技术扩增得到完整的hBD-3基因，并克隆到pPIC9K载体中。随后，将重组质粒转化到毕赤酵母中进行基因表达。通过SDS-PAGE和Westernblotting检测分泌的融合蛋白，结果显示成功地获得了分子量约为6kDa的重组蛋白。
接下来，为检测hBD-3的功能性活性，采用抑菌圈实验和最小抑菌浓度（MIC）实验检测毕赤酵母培养基中的hBD-3活性。结果表明，hBD-3对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌作用，抑菌圈直径以及MIC与hBD-3的浓度呈正相关。
综上，本实验成功地将hBD-3基因克隆到毕赤酵母中进行分泌表达，并获得了具有一定抑菌作用的hBD-3融合蛋白。后续实验将进一步优化表达条件和提高抑菌活性，为进一步研究hBD-3的作用机制提供基础。