一种猪轮状病毒亚单位疫苗的制备方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110227153A(43)申请公布日2019.09.13(21)申请号201910643370.XC07K14/14(2006.01)(22)申请日2019.07.17(71)申请人苏州世诺生物技术有限公司地址215000江苏省苏州市苏州工业园区若水路388号D座506室(72)发明人曹文龙孔迪滕小锘易小萍张大鹤(74)专利代理机构北京劲创知识产权代理事务所(普通合伙)11589代理人杨金贤(51)Int.Cl.A61K39/15(2006.01)A61P31/14(2006.01)C12N15/46(2006.01)C12N15/85(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表3页附图5页(54)发明名称一种猪轮状病毒亚单位疫苗的制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种猪轮状病毒亚单位疫苗的制备方法及其应用，所述疫苗包括：采用SEQIDNO:1的核酸分子或者与SEQIDNO:1的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的猪轮状病毒VP7蛋白。该疫苗使用真核表达，产品的抗原性、免疫原性与天然蛋白质相似，表达水平较高，免疫原性强，保护效果好，对动物没有致病性，并且本发明的疫苗可以通过生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，同时大大降低了疫苗生产成本。CN110227153ACN110227153A权利要求书1/1页1.一种免疫组合物，其特征在于：包含：采用序列如SEQIDNO:1所示的核酸分子或者与SEQIDNO:1的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的猪轮状病毒VP7蛋白。2.根据权利要求1所述的一种免疫组合物，其特征在于，所述猪轮状病毒VP7蛋白包含SEQIDNO:2的氨基酸序列或者与SEQIDNO:2的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的免疫组合物用于生产用于在受试动物中诱导针对猪轮状病毒抗原的免疫反应的药剂的用途。4.根据权利要求1或2所述的免疫组合物用于生产用于预防动物受猪轮状病毒感染的药剂的用途。5.一种免疫组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将密码子优化后的猪轮状病毒VP7蛋白编码基因克隆到真核表达载体中，得到含有VP7蛋白编码基因的重组质粒；S2、将步骤S1中所述的重组质粒转染CHO细胞，得到重组CHO细胞株；S3、通过培养、筛选、驯化步骤S2中所述的重组CHO细胞株，得到稳定且能够高度表达重组猪轮状病毒VP7蛋白的重组CHO细胞株；S4、对S3步骤中所述的重组CHO细胞株进行发酵培养，纯化后得到重组猪轮状病毒VP7蛋白。6.根据权利要求5所述的一种免疫组合物的制备方法用于生产用于在受试动物中诱导针对猪轮状病毒抗原的免疫反应的药剂的用途。7.根据权利要求5所述的一种免疫组合物的制备方法用于生产用于预防动物受猪轮状病毒感染的药剂的用途。8.一种蛋白，其包括以下组成的组：SEQIDNO:2的氨基酸序列或者与SEQIDNO:2的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。9.根据权利要求8所述的蛋白用于生产用于预防动物受猪轮状病毒感染的药剂的用途。10.根据权利要求8所述的蛋白用于生产用于检测猪轮状病毒相关诊断试剂的用途。2CN110227153A说明书1/7页一种猪轮状病毒亚单位疫苗的制备方法及其应用技术领域[0001]本发明属于动物疫苗技术领域，尤其涉及一种猪轮状病毒亚单位疫苗的制备方法及其应用。背景技术[0002]猪轮状病毒(PorcineRotavirus,PRV)属于呼肠病毒科轮状病毒属，是引起仔猪病毒性腹泻的主要病原体之一，主要感染1-4周龄仔猪，具有发病率高、分布广泛的特点。目前预防猪轮状病毒感染的主要方法是疫苗接种，应用疫苗免疫已经成为降低相关发病率、病死率和减轻经济负担的一个重要途径。目前市场上常见疫苗有强毒灭活苗和弱毒活疫苗，但由于轮状病毒的多型性；以及减毒苗与野毒株基因重组,引起回复突变等，这些因素都给该病的防疫造成巨大困难。[0003]猪轮状病毒VP7蛋白是轮状病毒(RV)粒子表面的外壳蛋白，即建立病毒体外层表面的糖蛋白，VP7蛋白被免疫力(immunity)当作是防止感染的途径，也是PRV主要的中和抗原，可以引起机体产生中和抗体，起到免疫保护作用。本发明因此而来。发明内容[0004]本发明克服了现有技术的不足，提供一种猪轮状病毒亚单位疫苗的制备方法及其应用，以解决现有技术中存在的问题。[0005]为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种免疫组合物，包含：[0006]采用序列如SEQIDNO:1所示的核酸分子或者与SEQIDNO:1的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的猪轮状病毒VP7蛋白。[0007]本发明一个较佳实施例中，所述猪轮状病毒VP7蛋白包含SE