大肠杆菌表达系统与蛋白表达纯化优质资料.doc
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大肠杆菌表达系统与蛋白表达纯化优质资料(可以直接使用,可编辑优质资料,欢迎下载)8.大肠杆菌表达系统与蛋白表达纯化大肠杆菌表达系统遗传背景清楚,目的基因表达水平高,培养周期短,抗污染能力强等特点,是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具。因此熟练掌握并运用大肠杆菌表达系统的基本原理和常规操作是对每一个研究生来说是非常必要的。本章节介绍了实验室常用的大肠杆菌表达系统的构成特点,归纳了利用大肠杆菌表达系统纯化重组蛋白的基本流程和详细操作步骤,并且结合笔者的操作经验,总结了初学者在操作过程中可能遇到
大肠杆菌表达重组蛋白的超声破碎及纯化.doc
大肠杆菌表达重组蛋白的超声破碎及纯化一可溶性蛋白的纯化(一)菌体的破碎1.仪器与材料:-80℃冰箱;超声波细胞破碎仪;50mMPBS或50mMTris-HClpH7.5;50ml离心管;冷冻高速离心机2.方法2.1反复冻融2.1.1收集菌液500ml,等分10份,4000r/min4℃离心15min,弃上清。2.1.2菌体沉淀中加入相同菌液体积的50mMPBS或50mMTris-HCl(选择使蛋白稳定的缓冲液和pH)重悬洗涤一次。2.1.3然后按原菌液体积的1/4加入缓冲液重悬菌体,并加入蛋白酶抑制剂PM
蛋白表达纯化实验步骤.doc
(完整word版)蛋白表达纯化实验步骤(完整word版)蛋白表达纯化实验步骤(完整word版)蛋白表达纯化实验步骤蛋白表达纯化实验步骤(待改进)1、取适当相应蛋白高表达的动物组织提total—RNA。2、设计蛋白表达引物。引物要去除信号肽,要加上适当的酶切位点和保护碱基。3、RT-PCR,KOD酶扩增获取目的基因cDNA。4、双酶切,将cDNA.克隆入PET28/32等表达载体。5、转化到DH5α感受态细菌中扩增,提质粒。6、将质粒转化入表达菌株,挑菌检测并保种。表达菌株如Bl21(DE3)、Rosett
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表达蛋白的分离与纯化;EMSA.docx
表达蛋白的分离与纯化大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在,需要不同的纯化策略。现在,许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能,这些自然需要将蛋白质分离出来后,进行进一步的研究来获得。分析蛋白质的方法学现已极大的简化和改进。现已有多种方法可以利用,蛋白质纯化策略也已实际可行。目前,待研究蛋白或酶的基因的获得已是相当普遍的事。可诱导表达系统特别是Studier等发展的以噬菌体T7RNA聚合酶为基础的表达系统的出现使人们能近乎常规地获得高表达水平的蛋白,表达水平可达细胞蛋白的2%以上,有些甚至高达50%