蛋白表达纯化实验步骤.doc
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(完整word版)蛋白表达纯化实验步骤(完整word版)蛋白表达纯化实验步骤(完整word版)蛋白表达纯化实验步骤蛋白表达纯化实验步骤(待改进)1、取适当相应蛋白高表达的动物组织提total—RNA。2、设计蛋白表达引物。引物要去除信号肽,要加上适当的酶切位点和保护碱基。3、RT-PCR,KOD酶扩增获取目的基因cDNA。4、双酶切,将cDNA.克隆入PET28/32等表达载体。5、转化到DH5α感受态细菌中扩增,提质粒。6、将质粒转化入表达菌株,挑菌检测并保种。表达菌株如Bl21(DE3)、Rosett
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蛋白表达纯化实验步骤(待改进)1、取适当相应蛋白高表达的动物组织提total—RNA.2、设计蛋白表达引物。引物要去除信号肽,要加上适当的酶切位点和保护碱基。3、RT-PCR,KOD酶扩增获取目的基因cDNA。4、双酶切,将cDNA.克隆入PET28/32等表达载体。5、转化到DH5α感受态细菌中扩增,提质粒.6、将质粒转化入表达菌株,挑菌检测并保种。表达菌株如Bl21(DE3)、Rosettagami(DE3)、Bl21codon(DE3)等。7、蛋白的诱导表达。1)将表达菌株在3mlLB培养基中摇至O
01-蛋白质的表达、分离、纯化实验.doc
蛋白质的表达、分离、纯化实验蛋白质表达、分离、纯化可以:(1)探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理;(2)供作结构与功能的研究;(3)作为催化剂、营养剂等。实验方法原理携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中,在37℃,IPTG诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子(Ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实为金属熬合亲和层析(MCAC)。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。实验材料:大肠杆菌BL2
01-蛋白质的表达、分离、纯化实验.doc
HYPERLINK"http://www.biomart.cn/experiment/79.htm"蛋白质的表达、分离、纯化实验蛋白质表达、分离、纯化可以:(1)探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理;(2)供作结构与功能的研究;(3)作为催化剂、营养剂等。实验方法原理携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中,在37℃,IPTG诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子(Ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实