检测轮状病毒并分型的组合物、试剂盒、用途及方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115261507A(43)申请公布日2022.11.01(21)申请号202110482244.8(22)申请日2021.04.30(71)申请人圣湘生物科技股份有限公司地址410205湖南省长沙市高新技术产业开发区麓松路680路(72)发明人黄河饶丹晏丝妮戴立忠邓中平刘佳(74)专利代理机构北京派特恩知识产权代理有限公司11270专利代理师李强张颖玲(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书13页序列表8页附图7页(54)发明名称检测轮状病毒并分型的组合物、试剂盒、用途及方法(57)摘要本发明属于分子生物学检测领域，更具体地，涉及检测A组、B组和C组轮状病毒并分型的组合物、试剂盒、用途及方法。本发明提供了一种能够检测轮状病毒并分型的组合物；同时，还提供了含该组合物的试剂盒，所述组合物的用途，以及用于检测轮状病毒并分型的方法。使用本发明的组合物，能够使用一个管在一次试验中同时检测这3种病毒并分型，其成本低，通量高，耗时少，其灵敏度为100拷贝/ml，特异性好。同时，检测时扩增效率一致，其检测结果表现一致。进一步增加了灵敏度和特异性。CN115261507ACN115261507A权利要求书1/1页1.一种能够检测轮状病毒并分型的组合物，所述组合物同时包括：如SEQIDNO:1所示的A组轮状病毒上游引物、如SEQIDNO:2所示的A组轮状病毒下游引物，和如SEQIDNO:3所示的A组轮状病毒探针；如SEQIDNO:4所示的B组轮状病毒上游引物、如SEQIDNO:5所示的B组轮状病毒下游引物，和如SEQIDNO:6所示的B组轮状病毒探针；和如SEQIDNO:7所示的C组轮状病毒上游引物、如SEQIDNO:8所示的C组轮状病毒下游引物，和如SEQIDNO:9所示的C组轮状病毒探针；以及如SEQIDNO:10所示的A、B、C组轮状病毒上游接头引物，和如SEQIDNO:11所示的A、B、C组轮状病毒下游接头引物。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物进一步包括：用于监控的内标上游引物、内标下游引物和内标探针。3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物进一步包括：如SEQIDNO:12所示的内标上游引物、如SEQIDNO:13所示的内标下游引物，和如SEQIDNO:14所示的内标探针。4.根据权利要求1所述的组合物，其中，如SEQIDNO:3所示的A组轮状病毒探针、如SEQIDNO:6所示的B组轮状病毒探针、如SEQIDNO:9所示的C组轮状病毒探针以及如SEQIDNO:14所示的内标探针具备信号物质。5.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物中引物的用量为15～100nM；所述组合物中探针的用量为5～75nM。6.权利要求1～5中任一项所述的组合物在制备检测轮状病毒并分型的试剂盒中的用途。7.一种检测轮状病毒并分型的试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1～5中任一项所述的组合物。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中，所述试剂盒进一步包括核酸释放试剂、dNTP、逆转录酶、DNA聚合酶、尿嘧啶DNA糖基化酶、PCR缓冲液以及Mg2+中的至少一种。9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括阳性对照和定量参考品。10.一种用于检测轮状病毒并分型的方法，所述方法包括以下步骤：1)释放待测样本的核酸，优选地，所述样本为粪便、肛拭子；2)使用如权利要求1～5中任一项所述的组合物对步骤1)获得的核酸进行荧光定量PCR；3)获得并分析结果。2CN115261507A说明书1/13页检测轮状病毒并分型的组合物、试剂盒、用途及方法技术领域[0001]本发明属于分子生物学检测领域，更具体地，涉及检测A组、B组和C组轮状病毒并分型的组合物、试剂盒、用途及方法。背景技术[0002]轮状病毒(Rotavirus，RV)，属于呼吸长孤病毒科(Reoviridae)，轮状病毒属是一种双链核糖核酸病毒，该病毒是引起人类，哺乳动物类和禽类病毒性腹泻的主要病原体。每年在夏秋冬季流行，感染途径为粪－口途径，轮状病毒内层衣壳所包含的基因由11个RNA片段组成，分别可以编码6个结构蛋白，分别为VP1‑VP4、VP6、VP7，这几个蛋白组成了轮组病毒的衣壳。按照VP6的抗原性可以将轮状病毒分为A‑H类，其中以危害婴幼儿的A组轮状病毒最为普遍，感染性发病率极高，而且范围很广，传染性极强，成为了小儿轮状感染出现频率最高的病毒之一，该病毒呈世界性分布，出生的小孩子基本上都感染过轮状病毒。除了A组轮状病毒之外，B组和C组轮状病毒也在世界范围内引起了儿童和成人腹泻散发和爆发。[0003]因