一种尿苷二磷酸的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108441532A(43)申请公布日2018.08.24(21)申请号201810162561.X(22)申请日2018.02.26(71)申请人安徽翠鸟生物技术有限公司地址247100安徽省池州市贵池区江南产业集中区新材料产业园20幢(72)发明人李豪李克进(74)专利代理机构苏州市指南针专利代理事务所(特殊普通合伙)32268代理人金香云(51)Int.Cl.C12P19/30(2006.01)C07H19/10(2006.01)C07H1/06(2006.01)C12R1/865(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种尿苷二磷酸的制备方法(57)摘要本发明提供了一种尿苷二磷酸的制备方法，其包括如下步骤：将尿苷、磷酸二氢钠、葡萄糖、硫酸镁与啤酒酵母混合发酵，发酵终止后得尿苷二磷酸发酵液；然后将所述的尿苷二磷酸发酵液进行冰块降温预处理，并通过分离提纯；再将纯化后的尿苷二磷酸进行醇沉结晶，最后进行干燥、粉碎处理。本方法获得的尿苷二磷酸产品的紫外纯度在80％以上，含水量在8％以下，质量得率在60％以上，相对于核苷酸发酵来说，本方法生产UDP的发酵时间缩短为1/2～2/3；预处理时间缩短为2/5；分离纯化的时间缩短为3/5。CN108441532ACN108441532A权利要求书1/1页1.一种尿苷二磷酸的制备方法，其特征在于包括如下步骤：1)将尿苷、磷酸二氢钠、葡萄糖、硫酸镁与啤酒酵母混合发酵，发酵终止后得尿苷二磷酸发酵液；2)将所述的尿苷二磷酸发酵液进行冰块降温预处理，并通过微滤装置分离出澄清的微滤液；3)将所述的微滤液进行分离纯化，采用不同浓度NaCl溶液进行淋洗、洗脱；4)将所述洗脱后的收集液进行纳滤除盐；5)将所述纳滤后的收集液用强碱型阴离子交换柱树脂进行脱色；6)将脱色后的尿苷二磷酸进行醇沉结晶、干燥。2.根据权利要求1所述尿苷二磷酸的制备方法，其特征在于在混合发酵时，每升发酵物含有尿苷30～40克，啤酒酵母350～500克，葡萄糖60～80克，磷酸二氢纳85～120克和硫酸镁6～9克。3.根据权利要求1或2所述的尿苷二磷酸的制备方法，其特征在于所述啤酒酵母为酵母细胞存活率在85％以上的淘汰啤酒酵母。4.根据权利要求1或2所述的尿苷二磷酸的制备方法，其特征在于混合发酵的发酵温度为35～40℃，pH值为6.6～7.0，发酵时间为2～4小时。5.根据权利要求1或2所述的尿苷二磷酸的制备方法，其特征在于温度降至10～20℃使发酵终止，所用终止反应剂为冰块。6.根据权利要求1或2所述的尿苷二磷酸的制备方法，其特征在于所述的预处理采用微滤处理，所用微滤膜的孔径为0.05～5.0μm。7.根据权利要求1或2所述的尿苷二磷酸的制备方法，其特征在于所述的分离纯化采用离子交换法，选用强碱型阴离子交换树脂。8.根据权利要求1或2所述的尿苷二磷酸的制备方法，其特征在于所述的纳滤采用截留分子量为400～500道尔顿的纳滤设备。9.根据权利要求1或2所述的尿苷二磷酸的制备方法，其特征在于所述的脱色采用吸附的方法，选用强碱型阴离子交换树脂。10.根据权利要求1或2所述的尿苷二磷酸的制备方法，其特征在于所述醇沉结晶时，用80～95％乙醇沉淀，并调pH值为3.7～3.9，温度为20～30℃，最终酒精浓度达到60～65％，醇沉时间为6～8h。2CN108441532A说明书1/6页一种尿苷二磷酸的制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种尿苷二磷酸的制备方法，具体地说，是以尿苷为原料，通过发酵和醇沉结晶两步法生产尿苷二磷酸的方法。背景技术[0002]上世纪六、七十年代，我国开始以核苷一磷酸为原料，利用酵母发酵生产核苷三磷酸(NTP)，主要生产腺苷三磷酸(ATP)和胞苷三磷酸(CTP)。利用酵母发酵生产ATP的研究较多，在七、八十年代已有较稳定的发酵生产工艺，并能进行小规模的生产。但这种发酵生产ATP、CTP等的工艺过程还存在很多的弊端，比如工艺复杂、操作繁琐、生产成本高，而且不适合大规模生产。主要原因如下：[0003]1、发酵底物浓度低,一般低于2％或20mg/ml，所得产物量不高，因而导致发酵设备利用率低，劳动生产率低，使生产成本增加。[0004]2、发酵液预处理工艺不合理，使用离心分离和酒精沉淀再回溶的法，能耗大，时间长，回收率低。[0005]3、分离纯化工艺不合理，分离纯化中采用的方法和使用的设备已落后，使周期长，回收率低，产品质量低，成本增加。[0006]尿苷二磷酸(UDP)是合成阿普林津(Ampligen)的原料之一。阿普林津是一种错配双链RNA药物(Polyl:C12U)，具有抗病毒和免疫调节的双重作用，高效低毒。目前，在国外该药正在进行