基于单粒径胶乳颗粒的检测NGAL的免疫胶乳比浊法试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108872616A(43)申请公布日2018.11.23(21)申请号201810716106.X(22)申请日2018.06.29(71)申请人宁波海壹生物科技有限公司地址315000浙江省宁波市高新区清逸路66号044幢4层东区(72)发明人柳建敏林威彦裘艳群(74)专利代理机构北京维正专利代理有限公司11508代理人黄勇(51)Int.Cl.G01N33/92(2006.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书1页说明书12页附图2页(54)发明名称基于单粒径胶乳颗粒的检测NGAL的免疫胶乳比浊法试剂盒(57)摘要本发明公开了一种基于单粒径胶乳颗粒的检测NGAL的免疫胶乳比浊法试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2，其中，所述试剂R1包含缓冲液、表面活性剂、促凝剂、螯合剂、防腐剂、还原剂、电解质和水，所述试剂R2包含缓冲液、稳定剂、电解质、包被有抗人NGAL多克隆抗体的胶乳颗粒，其中，所述还原剂为β-巯基乙醇，所述抗人NGAL多克隆抗体是生物素标记的抗人NGAL多克隆抗体，所述胶乳颗粒是链霉亲和素标记的单粒径胶乳颗粒。本发明的试剂盒可以同时检测血液与尿液样本中的NGAL，不仅具有提高的检测灵敏度和线性范围，还可以克服干扰因子的影响，检测到NGAL同源二聚体和异源二聚体，避免NGAL检测结果偏低导致医生的误判。CN108872616ACN108872616A权利要求书1/1页1.一种基于单粒径胶乳颗粒的检测NGAL的免疫胶乳比浊法试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2，其中，所述试剂R1包含缓冲液、表面活性剂、促凝剂、螯合剂、防腐剂、还原剂、电解质和水，所述试剂R2包含缓冲液、稳定剂、电解质、包被有抗人NGAL多克隆抗体的胶乳颗粒，其特征在于，所述还原剂为β-巯基乙醇，所述抗人NGAL多克隆抗体是生物素标记的抗人NGAL多克隆抗体，所述胶乳颗粒是链霉亲和素标记的单粒径胶乳颗粒。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗人NGAL多克隆抗体的胶乳颗粒占试剂R2的质量百分比为0.1％～1.5％。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述抗人NGAL多克隆抗体的胶乳颗粒占试剂R2的质量百分比为1.0％。4.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其特征在于，β-巯基乙醇占试剂R1的体积百分比为0.01％～0.2％。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，β-巯基乙醇占试剂R1的体积百分比为0.1％。6.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述胶乳颗粒的粒径为80-240nm。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述胶乳颗粒的粒径为198nm。8.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的NGAL多克隆抗体与链霉亲和素标记的单粒径胶乳颗粒的比例为100μg:1mg。9.根据权利要求1或2中任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂R1的组成为100mM4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、1.5mM吐温-20、100mM氯化钠、5.0mMPEG20000、3.0mMProclin950，3.0mM乙二胺四乙酸二钠，0.1％～2％(v/v)的β-巯基乙醇，其余为水，pH为7.0；和所述试剂R2的组成为150mM2-吗啉乙磺酸、100mM氯化钠、3.0mMProclin950，0.1g/L牛血清白蛋白，0.1wt％～1.5wt％的包被有抗人NGAL多克隆抗体的胶乳颗粒，其余为水，pH为7.0。10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述包被有抗人NGAL多克隆抗体的胶乳颗粒占试剂R2的质量百分比为1.0％，β-巯基乙醇占试剂R1的体积百分比为0.1％。2CN108872616A说明书1/12页基于单粒径胶乳颗粒的检测NGAL的免疫胶乳比浊法试剂盒技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于单粒径胶乳颗粒并可同时检测血清和尿液中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒。背景技术[0002]中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin，NGAL)，又称人脂质运载蛋白2(lipocalin2，Ln2)或噬铁蛋白(siderocalin)，是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。近年来，NGAL作为一种新的肾损伤标志物而倍受关注。[0003]NGAL是1993年Kjeldsen等发现的，与明胶酶B即基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase-9，MMP-9)密切相关。人类NGAL基因的全长为25000bp，其蛋白有三种存在形式：分子量为25kDa的单体、自身聚合