一种NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107942069A(43)申请公布日2018.04.20(21)申请号201711132885.0(22)申请日2017.11.15(71)申请人捷和泰（北京）生物科技有限公司地址100000北京市昌平区科学园路31号2号楼(72)发明人周淼(74)专利代理机构北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11465代理人姜海荣(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图6页(54)发明名称一种NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法，选择聚乙二醇六氨作为抗体结合胶乳颗粒的封闭剂；应用本发明进行中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测特异性强、灵敏度高、试剂盒稳定性好，可高效检测尿液、血浆、血清中的NGAL含量，并且检测结果与荧光免疫层析法和酶联免疫吸附法相关良好。CN107942069ACN107942069A权利要求书1/1页1.一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳免疫比浊法检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和校准品，其中，所述试剂R2包括抗体、胶乳颗粒和R2缓冲液，其特征在于：所述试剂R2所用封闭剂为聚乙二醇六氨，聚乙二醇六氨的化学结构式为H-(O-CH2-CH2)n-(NH)5-NH2。2.根据权利要求1所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于：所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。3.根据权利要求1所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于：所述胶乳颗粒粒径为100-400nm，表面电荷为0.05-0.2mmol/g。4.根据权利要求1所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于：所述R2缓冲液包括缓冲液，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液、醋酸缓冲液或柠檬酸缓冲液中的任意一种或几种；所述缓冲液pH为5.0-10.0。5.根据权利要求1所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于：所述R2缓冲液还包括电解质、表面活性剂、防腐剂、生物稳定剂中的任意一种或几种，所述电解质、表面活性剂、防腐剂、生物稳定剂中的任意一种或几种使用时混合于所述缓冲液中。6.一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳免疫比浊法检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述试剂R2的制备包括如下步骤：(1)使用包被缓冲液分别对胶乳颗粒与抗体进行稀释，将稀释后的胶乳颗粒与抗体混合均匀，形成胶乳颗粒与抗体的混合液；(2)向胶乳颗粒与抗体的混合液中加入EDC进行活化，搅拌后离心去上清；(3)向步骤(2)离心后的沉淀中加入聚乙二醇六氨，搅拌过夜后离心去上清；(4)向步骤(3)离心后的沉淀中加入R2缓冲液进行重悬，超声分散均匀，并于25-60℃熟化16-72小时，得到稳定的抗体包被的胶乳颗粒；(5)使用R2缓冲液将步骤(4)得到的抗体包被的胶乳颗粒稀释到0.05-0.2％wt，4-10℃保存。7.根据权利要求6所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳免疫比浊法检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述包被缓冲液包括磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液、醋酸缓冲液或柠檬酸缓冲液中的任意一种或几种；所述包被缓冲液pH为5.0-10.0。8.根据权利要求6所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳免疫比浊法检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述聚乙二醇六氨的使用浓度为0.1-0.5％wt，所述聚乙二醇六氨的使用体积与步骤(2)中胶乳颗粒与抗体的混合液体积相同。9.根据权利要求6所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳免疫比浊法检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)、(2)、(3)中搅拌过程的温度为25-55℃。2CN107942069A说明书1/8页一种NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法，具体地说，涉及一种以聚乙二醇六氨为封闭剂的NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法。背景技术[0002]急性肾损伤(AKI)是一种发病率和死亡率均较高的疾病，由于该病发病机理不明，并且缺乏准确可靠的早期诊断标志物，因此临床上尚未出现有效治疗药物。传统的肾损伤标志物(如血清肌酐、胱抑素C，α1微球蛋白、β2微球蛋白及视黄醇结合蛋白)多为功能性标志物，但绝大多数AKI的结构变化发生在功能性障碍之前，因此，结构