植物DNA提取试剂盒.doc

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注意：本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途
植物DNA提取试剂盒
PlantDNAout
货号:M090099

产品及特点
植物DNAout是根据经典的方法改良得到的专门提取新鲜或冷冻植物组织基因组DNA(包括叶绿体DNA和线粒体DNA)的试剂盒。
操作快速，整个过程在30分钟内即可完成。
纯度高，A260/A280在1.9左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。提取得到的DNA大小在30-50Kb之间。
产率高，高于大多数同类产品(尤其是基于离心柱的提取产品)。
安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

规格及成分
成份10次包装溶液A7.5mL溶液B7.5mLRNaseA溶液(10mg/mL)150uL使用手册1份
运输及保存
常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法
先将全部RNaseA溶液全部加入到溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A最好在4℃保存。
65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取0.75mL加入离心管放置于65℃待用。
称取植物组织0.1g左右，剪成微小的碎片，加入到预热的溶液A中短暂匀浆。也可以液氮研磨后将粉末加入到预热的溶液A中(建议不要在陶器或玻璃研钵中破碎细胞，因为其中的主要成分二氧化硅会非特异地吸附DNA，降低DNA回收量。但可以在塑料研钵中研磨)。匀浆过程中将产生大量泡沫，属于正常现象。将匀浆液置于65℃水浴保温5分钟，然后将匀浆液(包括植物碎片)全部转移到新离心管(此时匀浆液较为粘稠，可将枪头剪去一截后转移上清，植物碎片可倒入)。
12000-15000g室温离心3分钟，将上清转移到新离心管中(上清液的体积一般为200-700µL，具体体积取决于植物组织种类。如果体积超过700µL，多余部分可以不要)。有的上清液中会有少量细小块状物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色混浊状，将其置于冰浴中放置5分钟。
12000-15000g室温离心3分钟，转移上清到新离心管中。
加入0.2mL的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。
12000-15000g室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物。小心转移上清到新离心管中。
重复6-7步一次。
加入0.6-1倍体积的异丙醇(自备)，上下颠倒30秒混匀，12000-15000g离心5分钟，弃上清，管底将有微小DNA沉淀。
沉淀用75%乙醇清洗2次后，室温晾干。
加入50-100µL自备缓冲液(如TE)和5-15uLRNaseA溶液溶解沉淀(由于基因组DNA较大，一般需要过夜溶解。RNaseA最好先沸水浴15分钟以灭活残留DNase)。DNA即可用于电泳，酶切和PCR等反应。如果需要测OD，则必须乙醇沉淀去除降解的RNA。