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植物DNA的提取 核酸的分类及存在 由于生物材料的差异,不可能有一种普遍适用的提纯生物体DNA的方法,植物材料有坚固的细胞壁,核酸含量较少,含有较多的多糖物质和色素、核酸酶活性高等这些因素给植物DNA的分离纯化带来了困难。 DNA提取与SDS法相比 CTAB溶解细胞膜,并结合核酸,使核酸便于分离。 Tris-HCl(pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏。 NaCl提供一个高盐环境,使CTAB与核酸形成的复合物充分溶解,存在于液相中。 EDTA(乙二胺四乙酸)螯合Mg2+或Mn2+,抑制DNase活性。 β-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,PVP-K30(聚乙烯吡喏烷酮)可以降低酚化合物的离子化,使酚容易去除。注意DNA纯化(去杂质)操作步骤3、加入等体积的Tris饱和酚-氯仿-异戊醇(25:24:1),在摇床上充分摇动15min;10000rpm离心10min,取上清700μl。 4、加入1/10上清液体积的Rnase,混匀;37℃水浴40min-1h。 5、加入等体积的的氯仿-异戊醇(24:1),摇床上摇动15min;10000rpm离心10min,取上清约500μl。 注意事项谢谢