土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.doc

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、课题目标研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。二、课题重难点课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制。课题难点：对分解尿素的细菌的计数。三、材料分析实验材料：土壤实验药品：KH2PO4、Na2PO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂5%HCI5%NaOHPH试纸蒸馏水70%酒精棉球灭过菌制备好的牛肉膏蛋白胨培养基平板实验器具：锥形瓶、试管、涂布器、培养皿（套装）、酒精灯、天平、量筒、烧杯、棉塞、高压蒸汽灭菌锅、移液器、牛皮纸、橡皮筋、超净台四、课时安排（本课题分3个课时进行）第1课时：基本概念分析、实验设计第2课时：培养基配制、样品稀释涂布第3课时：分析交流讨论五、方法步骤
1、制备选择培养基
2、微生物的培养与观察
六、实验操作中的注意事项
1、全程要求无菌操作：操作环境、器材等要灭菌。2、土壤取样：经常施尿素的地方，雨后收集或提前给泥土浇水，绝大数细菌分布在距地表约3——8cm土壤层，取样时用已灭菌的小铲铲去表土3cm.
3、制备培养基：分别制备选择培养基，牛肉膏蛋白胨培养基（老师课前准备好）4、样品的稀释和涂布：各个细节均需保证无菌（为本节课学生练习的重点）1）土壤的称取、稀释，每一步都要在火焰旁操作。操作中试管口和移液管应在离火焰1—2cm处。整个操作过程中使用一支移液管，不要接触任何其他物体。2）涂布：①取0.1ml菌液（约滴2滴）②涂布器末端先浸在体积分数为70﹪的酒精中，取出时要让多余的酒精在烧杯中滴尽，再在火焰上引燃，拿开让酒精燃尽后冷却8—10s才使用，操作中注意不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。③同一个稀释度下应涂布4个培养皿（其中3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基），全部做需涂布21个培养皿（其中一个空白对照），因此，每个培养皿要做好编号，培养基的种类、培养日期以及稀释度等。5、微生物的培养与观察1）培养：30℃培养较好2）观察：课后间隔24小时观察1次，计数菌落数量，照像。3）检测培养基pH变化：加入酚红指示剂，也可直接用pH试纸。4）统计实验结果：注意选取菌落数介于30－300个之间的平板进行计数，且重复的结果要有相近性。6、实验结束后，各种器材，药品都应进行严格灭菌，以防杂菌污染环境或对人员造成伤害。