土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、课题背景二、研究思路根据这一思路，你能否将土壤中分解尿素的细菌分离出来，说说你的思路。（1）将土壤中的固氮菌分离出来（一）筛选菌株1、利用尿素作为唯一氮源的培养基分离出的微生物①只是一种细菌吗？②都是能分解尿素的微生物吗？②不一定。因为有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物进行生长繁殖。2、请你提供一种方法，判断分解尿素的细菌确实能将尿素分解成氨。3、要验证以尿素为唯一氮源的培养基对土壤中的细菌确实具有选择作用，你该如何设计实验。任务2：统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌？1、显微镜直接计数2.稀释涂布平板法（活菌计数法）⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。讨论（1）操作方法：稀释涂布平板法（2）原理：1个菌落→1个活菌（3）注意事项例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。三、实验的具体操作㈠.土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。㈡.制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。◆应在火焰旁称取土壤10g。◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？㈣.取样涂布㈤.微生物的培养与观察微生物的培养与观察关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。四、结果分析与评价1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。