土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、课题背景(理论基础)3、课题目的一.研究思路一、研究思路2、实验室中微生物的筛选原理（同实例）：15.0g培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基中尿素为唯一氮源，只有能合成脲酶分解尿素的微生物才能生长、发育、繁殖4选择培养基：5、怎样证明此培养基具有选择性呢？（一）土壤取样（二）制备培养基[三]样品稀释㈣.取样涂布看课本P22，并讨论你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？(三)设置对照实验(2)设置对照实验，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素？每个稀释度均用3个选择培养基和1个牛肉膏蛋白胨培养基（原因？）。初次范围宽些稀释101～107，涂布平板选103～107，取小于0.1ml,注意◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。㈤.微生物的培养与观察（六）菌落计数1显微镜直接计数：2.间接计数法（活菌计数法）⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。⑵常用方法：稀释涂布平板法。2稀释涂布平板法（间接计数）计算公式：注意事项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。(原因？思考)菌落菌落一般来说，在一定培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间）同种微生物表现出稳定的菌落特征，如大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一度的特征，菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据。◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。[一]无菌操作1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。[二]做好标记注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。[三]制定计划四、结果分析与评价四、结果分析与评价3.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。五、课题延伸大肠杆菌呈黑色中心,有或无金属光泽本课题知识小结:巩固练习3.下列说法不正确的是（）A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶。B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值。C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）A.较多的氮源物质B.较多的碳源物质C.青霉素类药物D.高浓度食盐