微波辅佐提取-高效液相色谱法测定果蔬中的Vc含量.docx

微波辅佐提取-高效液相色谱法测定果蔬中的含量
应用化学09952095陈智毅张天祥潘大卫廖年华杨樱芝黄秋香黄嘉欢潘潞怡黎淑貞谢宇虹

摘要Vc在体内参与多种反应，如氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。本实验通过测定果蔬中的Vc含量，掌握高效液相色谱法原理及应用，熟悉一般样品前处理方法，掌握校准曲线定量法。本实验采用Phenomenex18柱(250mm×4.6mm,I.D.5μm)；：3%的乙腈-0.05mol/LKH2PO4水溶液（v/v）作为流动相，流速1mL/min的HPLC操作条件；使用微波辅助提取技术提取水果中的Vc，采用紫外检测器，在265nm波长下测定Vc的吸光值。并与标准系列比较，以保留时间定性，以峰面积定量。Vc浓度在5~100mg/L范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系（Y=38395x+11668,R2=0.999）。
关键词微波辅佐提取高效液相色谱法Vc紫外检测器
引言
维生素（Vitamin，V）又叫L-抗坏血酸（AsorbiAid），是一种水溶性维生素。研究发现，维生素C在人体内作为辅酶的成分调节机体代谢，减弱毛细血管脆性，增加机体抵抗力；维生素C的协同作用可以提高人体对铁的吸收率，促进外伤愈合。由于Vc是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成，它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效Vc的缺乏可导致多种疾病，其含量高低常作为某些疾病诊断及营养分析的重要指标，因此Vc的定量分析在食品、医药等领域相当重要【1】。下图是Vc的结构式：
图1.维生素c分子结构式
Vc在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔类水果中含量较高。樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中Vc含量在50-300mg/100g。微波辅助萃取具有快速高效、操作简便、节省溶剂等优点，在天然产物、环境、食品等领域中得到广泛应用。
目前测定Vc的方法很多，包括药典中的标准方法——碘量法、紫外分光光度法、荧光分光光度法、近红外分光光度法、伏安法等【2】。各种方法均有自己的独特之处，有些方法要求的实验条件和操作技术较高，而有些方法步骤烦琐，不利于快速分析。微波辅助萃取具有快速高效、操作简便、节省溶剂等优点，在天然产物、环境、食品等领域中得到广泛应用。本实验采用微波辅助萃取法快速萃取蔬果中的Vc，采用高效液相色谱进行分析，以Vc标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做校准曲线，根据样品中Vc的峰面积，由校准曲线计算其浓度。
实验部分
仪器试剂
仪器：高效液相色谱仪：L-2010（岛津香港有限公司）；微波萃取仪（上海新仪微波化学科技有限公司）；色谱柱：依利特或Phenomenex18柱(250mm×4.6mm,I.D.5μm)。
试剂：乙腈（色谱纯），冰乙酸，维生素C，磷酸二氢钾等均为分析纯；西红柿、橘子、小西红柿为果蔬样品。实验用水为超纯水。
Vc标准溶液：快速准确称取0.025g，用1mol/L乙酸溶液溶解，定量转移至250mL容量瓶中，用1mol/L乙酸溶液定容，得到100mg/L标准溶液备用，现用现配。
色谱条件：流动相：3%的乙腈-0.05mol/LKH2PO4水溶液（v/v）；流速1mL/min；紫外检测波长265nm；进样量10μL。
实验步骤
按操作说明开启液相色谱仪，设定方法参数。（2）样品准备：准确称取切碎的蔬果样品小西红柿5.0006g，西红柿5.0220g，橘子5.0024g，以1mol/L乙酸50mL为萃取溶剂，微波功率设为600W，萃取时间为10min，萃取温度设定为恒温50℃。萃取液过滤后用1mol/L乙酸溶液定容至100mL，制成供试品溶液。（3）定性分析：分别取10μL50mg/L的Vc标准溶液和供试品溶液，进HPLC分析。根据保留时间定性分析蔬果中的Vc。（4）校准曲线绘制：分别配制5，20，50，80，100mg/L的Vc样品溶液，待液相色谱稳定后进样分析。以Vc色谱峰面积对浓度作图，绘制校准曲线。（5）定量分析：供试品溶液经0.45μm微孔滤膜过滤后进行HPLC分析。记录其Vc的色谱峰面积，根据校准曲线计算蔬果样品中Vc的含量，结果以mg/100g表示。（6）实验结束后，按要求清理好仪器。
3.实验结果与讨论
1.标准曲线的测绘
表1.标准曲线的浓度和峰面积
标准溶液/mg·L-15205080100峰面积A193244758501195789831507573788688
图2.标准曲线

由图可得，所得标准曲线方程为：峰面积A=38395x+11668，相关系数R2=0.999。
2.各种样品提取液色谱图的绘制
分别以桔子、枣子、柚子、百香果四水果的提取液为样品，色谱条件为：流动相：3%的乙腈-0.05mol/LKH2PO4水溶液（v/v）；流速1mL/min；紫外检测