扶正清瘿方治疗桥本氏甲状腺炎实验研究.pdf

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桥本氏甲状腺炎(№‰’sbiopsy．F黼)和血清抗甲扶正清瘿方治疗桥本氏甲状腺炎实验研究中医药学刊曼蹦2刘晓鸫唐汉钧动物模型的制作参照文献方法Ⅲ。将购自SIGMADiekir州rt公司的FACScalibtan型。荧光标记小鼠CD3+、CHl眶SE．～qOHIVES(上海巾医药大学附属龙华医院中医外科，200032，上海／／第一作者男．1973年生，副主任医师)摘要：目的：探讨扶正清瘿方治疗桥本氏甲状腺曼的免疫学机制。方法：建立实验性自身免疫性甲状腺麦动物模型(EAT)，以地塞米松、雷公藤多甙片、优甲乐为对照组，检测甲状腺淋巴细胞浸润分规指数，自身甲状臃抗体1k关键词：扶正清瘿方；桥本氏甲状腺炎；中圉分类号：R582文献标识码：A文章编号：1009—5276(2004)03一0497—03thyroidi如；HT)，又称桥disease；HD)，其病理特点为甲状腺呈弥漫性淋巴细胞幔润、纤维化、问质萎缩及腺泡细胞嗜酸性改变，又称为慢性淋巴细胞性甲状腺炎。随着细针穿刺细胞学检查(Fme—needle状腺抗体水平的测定，近年来发现桥本病为甲状腺炎中最为常见的一种类型。本病已公认为自身免疫性疾病，已知体液免疫和细胞免疫均参与本病的发病机制．国内外正开展大量的研究以近一步明确其发病机制。唐汉钧教授认为．桥本病的发病原因与脾虚和外邪二者关系紧密，所谓“邪气所凑，其气必虚”，正邪交争于颈前．气滞痰凝血瘀而发为甲肿，机体阴阳失调，则临床症见多端，据此病机临床中以扶正清瘿法组方治疗桥奉氏甲状腺炎疗效明显，本研究通过实验性自身免疫性甲状腺炎动从组织病理学、体液免疫学、淋巴细胞特异性增殖、T淋巴细胞亚群分类、免疫细胞因子等多角度，分析该方的疗效和作用机制，探讨中医学治疗桥本病的用药特点，为临床治疗提供科学依据。1材料和方法实验动物雌性C57BL]6小鼠，6～8周龄，体重在公司的猪甲状腺球蛋白(PorcineThyrcghbulin缓冲液溶解成PTg含量为2mg／ma的溶液，与弗氏佐剂(内含8m一一HR37a结核杆菌，干重)等体积混合，乳化成油包水制剂，以该乳化剂对c57BI／6小鼠进行皮下多点注射免疫．每H小鼠注射的PTg总剂量为400ug。各模型组与注射后第7天，用上述PBS溶解的Tg溶液与弗氏不完全佐剂制成乳化剂，对各模型组小鼠加强免疫一次。随机分组：正常组，EAT模型组、EAT中药扶正清瘳组、EAT地塞米松片组、EAT甲状腺索片组、EAT雷公藤片组。药物制备扶正清瘿方：黄苠、板蓝根、黄芩、红枣、生草等。实验用药经水煎、过滤．浓缩，薛提，加蒸馏水稀释，最后每血药液古生药0．269／ml。醋酸地寒米松片。中国信谊制药厂生产，规格：0．75mg×100片，批号：001113。雷公藤多苷片，中国泰州制药厂生产，规格：10mg×印片，批号：010112。甲状腺索片，德国默克公司优甲乐50(Euthyrox@一50)规格：50ugxl00片．批号：200l实验动特络药：阻小鼠每日一次灌胃，每次Iml计算。扶正清瘿方组，每毫升药液含生药026．g，IIll，相当于成人剂量的5倍。EAT地塞术松片组(参照成人每日用量0．15Ⅱ培(2]，制成水溶液灌服．每日lml)，EAT甲状腺紊片组(参照成人每日用量上限200ugC2】，翩成水溶液灌服，每日1Ⅱ吐)，EAT雷公藤多甙片组(参照成人每日用量1．5rng，kg嘲，制成水溶液灌服，每日lml)。各治疗组均于造模后第15天开始灌胃给药治疗。甲状腺球蛋白抗体(Tg—Ab)检测各组实验小鼠均与第二次免疫注射后第45天摘眼球取血处死，离心分离血清，用ELISA法检测小鼠Tk—Ak甲状脒病理控测各组实验小鼠与实验结束后取甲状腺组织，制成HE染色切片．光镜下观察病理变化分级指数：0=正常甲状腺组织；1=局灶性的甲状腺炎；2；更加严重的甲状腺炎但不超过40％；3=弥漫性的甲状腺炎达40％～80％；4=弥漫性的甲状腺炎超80％；，r淋巴壹目匏亚群洲定流式细胞仪为美国Becton—CD4+、CD8+抗体均为美国BD公司产品。免疫细胞因子IFN—T控测采用ENDOGEN公司—二=一的ELISA双抗体夹心法试剂盘。491实验结果均采用S$'SSl0．0统计软件进行T检验统计分析。2结果对小鼠甲状藤球蛋白抗体(T官一Ab)的影响：Ab，T淋巴细胞亚群分类，免疫细胞因子IFN一7，以SF'SSl00软件做T检验分析结果。结果：扶正清瘿方能明显降低模型动物的自身免疫反应，其作用优于雷公藤多甙片和优甲乐组，与地塞采松相似。讨论：扶正清瘿方治疗桥本氏甲状脓的机制可能是抑制了T淋巴细胞亚群的免疫功能。淋巴细胞特异性增殖反应本病(Hashimoto’s物模型。25日±29'由中科院动物中心提供。FTg)用PBS中掌w第22卷第3期4丰