一种提取病毒核酸的试剂盒和提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112251492A(43)申请公布日2021.01.22(21)申请号202011267557.3(22)申请日2020.11.13(71)申请人上海绅道生物科技有限公司地址200241上海市闵行区东川路555号乙楼3001室(72)发明人杨广宇李梁梁佳茗王志耘(74)专利代理机构上海旭诚知识产权代理有限公司31220代理人郑立(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)C12Q1/70(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种提取病毒核酸的试剂盒和提取方法(57)摘要本发明提供了一种提取病毒核酸的试剂盒和提取方法。本发明第一方面提供了一种提取病毒核酸的试剂盒，包括裂解液、磁珠悬浮液、蛋白酶K溶解液、核酸助沉剂溶液、洗涤液和洗脱液；其中，裂解液包括Tris‑HCL、异硫氰酸胍、N‑月桂酰肌氨酸钠、EDTA、TritonX‑100、CTAB和Antifoam204；洗涤液包括Tris‑HCL、PEG6000和氯化钠；洗脱液为纯水。本发明提供的试剂盒和提取方法提高了核酸的提取效果，而且可实现室温下病毒核酸的提取，避免了加热处理造成的基因污染，此外，还避免了乙醇对提取过程的影响，与常规磁珠法相比，提取时间可缩短至15min左右，提取过程更加快捷简便。CN112251492ACN112251492A权利要求书1/1页1.一种提取病毒核酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括裂解液、磁珠悬浮液、蛋白酶K溶解液、核酸助沉剂溶液、洗涤液和洗脱液；其中，所述裂解液包括Tris-HCL、异硫氰酸胍、N-月桂酰肌氨酸钠、EDTA、TritonX-100、CTAB和Antifoam204，所述异硫氰酸胍的浓度为2-6M；所述蛋白酶K溶解液包括蛋白酶K、甘油、乙酸钠和氯化钙；所述洗涤液包括Tris-HCL、PEG6000和氯化钠；所述洗脱液为纯水。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解液中，Tris-HCL的浓度为30-60mM，N-月桂酰肌氨酸钠的质量分数为0.05-2％、EDTA的浓度为5-10mM、TritonX-100的体积分数为1-3％、CTAB的质量分数为0.1-1％、Antifoam204的体积分数为0.02-0.1％，其中，所述Tris-HCL的pH为8.0-9.5。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁珠悬浮液中磁珠的浓度为20-50mg/mL。4.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述磁珠的粒径为10-50nm。5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K溶解液中，蛋白酶K的浓度为50-100mg/mL、甘油的体积分数为30-70％、乙酸钠的浓度为10-40mM、氯化钙的浓度为0.1-0.5mM，其中，所述乙酸钠的pH为7.0-8.0。6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸助沉剂的浓度为10-30mM。7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液中，Tris-HCL的浓度为10-50mM、PEG6000的质量分数为5-10％，氯化钠的浓度为300-500mM，其中，所述Tris-HCL的pH为8.0-9.0。8.一种使用权利要求1-7任一项所述试剂盒的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、将待测样品、裂解液、蛋白酶K溶解液、核酸助沉剂溶液、异丙醇和磁珠悬浮液混合均匀，室温孵育5min，期间混匀2次，随后磁性分离得到吸附病毒核酸后的磁珠；步骤2、将所述吸附病毒核酸后的磁珠重悬于洗涤液中，洗涤两次后收集洗涤后的磁珠；步骤3、将所述洗涤后的磁珠重悬于洗脱液中，室温孵育5min，并收集洗脱液。9.如权利要求8所述提取方法，其特征在于，步骤1中，将150-300μL的待测样品、300-500μL的裂解液、20-50μL蛋白酶K溶解液、5-20μL核酸助沉剂溶液、100-300μL异丙醇和50-100μL磁珠悬浮液混合均匀；步骤2中，洗涤液为500-1000μL；步骤3中，洗脱液为50-100μL。10.如权利要求9所述的提取方法，其特征在于，步骤1中，所述待测样品和所述裂解液的体积比为1：1～1.75。2CN112251492A说明书1/5页一种提取病毒核酸的试剂盒和提取方法技术领域[0001]本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种病毒核酸提取试剂盒和提取方法。背景技术[0002]核酸提取技术是病毒分子生物学研究的基础，现已广泛应用于病原微生物检测、临床疾病诊断、环境微生物检测、食品安全检测以及法医学鉴定等众多领域。在提取过程中要遵循以下原则：提取尽可能充分，保证一级结构的完整性，避免蛋白质、脂类物质和多糖等生物大分子的污