用于提取病毒核酸的试剂盒和方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108642044A(43)申请公布日2018.10.12(21)申请号201810408853.7(22)申请日2018.04.28(71)申请人广州奕昕生物科技有限公司地址510663广东省广州市高新技术产业开发区崖鹰石路8号A306(72)发明人陈永恒谭杰峰宋卉周秋霞(74)专利代理机构广州三环专利商标代理有限公司44202代理人宋静娜郝传鑫(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)C12Q1/6806(2018.01)C12Q1/6851(2018.01)C12Q1/70(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称用于提取病毒核酸的试剂盒和方法(57)摘要本发明公开了一种用于提取血筛混检样本中病毒核酸的试剂盒和方法，试剂盒包括裂解液、结合液、第一漂洗液、第二漂洗液、洗脱液、二氧化硅磁珠、蛋白酶K和核酸助沉剂，其中，第一漂洗液含有结合液和柠檬酸钠。本发明还公开了一种快速检测血浆\血清中病毒的方法。采用本发明的试剂盒和方法，在特定的pH下可以从样本中轻松捕获微量病毒核酸，所得核酸回收率高；操作流程简洁，30min内即可完成病毒核酸的提取纯化，比现有的大多数商品化试剂盒都省时省力；而且针对的样本体积量大，可以对小体积样本合并提取，节省时间，节省试剂。CN108642044ACN108642044A权利要求书1/1页1.用于提取血筛混检样本中病毒核酸的试剂盒，其特征在于，包括裂解液、结合液、第一漂洗液、第二漂洗液、洗脱液、二氧化硅磁珠、蛋白酶K和核酸助沉剂，其中，所述第一漂洗液含有所述结合液和柠檬酸钠。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解液含有高氯酸钠、Tris-HCl、EDTA、DTT和TritonX-100。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述结合液中含有高氯酸钠、DEPC水和无水乙醇。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第二漂洗液中含有DEPC水和无水乙醇。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗脱液为Tris-HCl和DEPC水的溶液。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K采用DEPC水溶解。7.一种血筛混检样本中病毒核酸的提取方法，其特征在于，采用权利要求1～6任一项的试剂盒提取病毒核酸，具体包括如下步骤：(1)样本准备：取灭活处理后的血清或血浆若干份，每份体积相同，分别标记和编号，将若干份血清或血浆合并成1份待测样本；(2)设置阳性对照和阴性对照样本；(3)核酸提取阶段：1)向深孔板1中加入第一漂洗液，放到核酸提取仪器相应卡槽上；2)向深孔板2中加入第二漂洗液，放到核酸提取仪器相应卡槽上；3)向洗脱管中加入洗脱液，放到核酸提取仪器相应卡槽上；4)将磁力套板放到核酸提取仪器相应卡槽上；5)往深孔板3中依次加入所述待检测样本、蛋白酶K溶液、核酸助沉剂和裂解液；6)核酸提取仪器初始化，然后按设定提取程序进行样本裂解；7)裂解完成后，核酸提取仪器暂停；8)取出深孔板3，依次加入纳米磁珠，结合液；9)继续运行核酸提取仪器，直至提取完成。8.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中待测样本体积为2.4mL；不足2.4mL的待测样本用经鉴定后的阴性空白血浆补足。9.一种快速检测血浆\血清中病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：将12人份的血浆/血清样品合并为一个检测样本，采用权利要求1～6任一项的试剂盒进行提取，若提取的核酸经PCR检测相应的病毒DNA/RNA为阴性，则判定为该12个人的血浆/血清样品为阴性；若出现阳性结果，则分别采用PCR检测各人的血浆/血清样本。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述PCR为荧光定量PCR。2CN108642044A说明书1/6页用于提取病毒核酸的试剂盒和方法技术领域[0001]本发明涉及核酸纯化技术领域，尤其是用于提取血清\血浆中病毒核酸的方法和试剂盒。背景技术[0002]核酸的提取纯化是进行分子生物学各项研究的基础，特别是在分子诊断领域，PCR、RT-PCR、Northernblot、RT-qPCR、cDNA文库构建、酶切等技术手段都需要纯度高、完整性好的核酸。但由于外源及内源性核酸酶的存在及其酶活性相当稳定等原因，使得提取和纯化高质量的核酸相对比较困难。核酸提取试剂配方对核酸的质量和得率有很大的影响，因此研发高效快速、回收范围广、得率高的核酸提取试剂是本领域不断探索的课题。磁珠法作为近年来兴起的新型核酸提取方法，主要原理是基于磁性纳米材料一在高盐环境下对核酸进行特异性的吸附，经过磁性分离和漂洗杂质后，在低盐溶液中被洗脱下来，从而达到对核酸进行提取纯化的目的。[0003]目前市场上