一种核酸提取试剂盒以及提取核酸的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114634925A(43)申请公布日2022.06.17(21)申请号202011480855.0(22)申请日2020.12.15(71)申请人深圳市帝迈生物技术有限公司地址518107广东省深圳市光明区玉塘街道田寮社区光侨路高科创新中心B座10层(72)发明人翟留伟其他发明人请求不公开姓名(74)专利代理机构深圳市威世博知识产权代理事务所(普通合伙)44280专利代理师黎坚怡(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图1页(54)发明名称一种核酸提取试剂盒以及提取核酸的方法(57)摘要本申请涉及生物技术领域，具体公开了一种核酸提取试剂盒以及提取核酸的方法，该核酸提取试剂盒包括：裂解缓冲液、蛋白酶K冻干粉、漂洗缓冲液、洗脱液以及磁珠吸附液；蛋白酶K冻干粉包括：MOPSO、蛋白酶K、防腐剂、甘露醇以及葡聚糖。通过上述方式，核酸提取试剂盒中蛋白酶K的剂型为冻干粉，可在室温下长期稳定储存，从而克服了已有蛋白酶K溶液存在的缺点。CN114634925ACN114634925A权利要求书1/2页1.一种核酸提取试剂盒，其特征在于，包括：裂解缓冲液、蛋白酶K冻干粉、漂洗缓冲液、洗脱液以及磁珠吸附液；所述蛋白酶K冻干粉包括：MOPSO、蛋白酶K、防腐剂、稳定剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸提取试剂盒的储存温度为4‑30℃。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解缓冲液包括：MOPSO缓冲液、异硫氰酸胍、非离子去垢剂、阴离子去垢剂、EDTA、二硫苏糖醇、异丙醇、氯化钠以及防腐剂；所述漂洗缓冲液包括：氯化钠和乙醇；所述洗脱液包括：无RNA酶的水；所述磁珠吸附液包括：0.5‑1.5μm磁珠、40‑300nm磁珠、MOPSO缓冲液、以及防腐剂。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，在所述裂解缓冲液中，所述MOPSO缓冲液的浓度为10‑100mM，所述MOPSO缓冲液的pH值在6.2～7.6之间，所述异硫氰酸胍的质量百分比浓度为0.1％‑5％，所述非离子去垢剂的质量百分比浓度为0.1％‑5％，所述阴离子去垢剂的质量百分比浓度为0.01％‑1％，所述二硫苏糖醇的浓度为1‑20M，所述EDTA的质量百分比浓度为0.1‑200mM、所述异丙醇的质量百分比浓度为10％‑99.5％，所述氯化钠的浓度为1‑200mM，所述防腐剂的质量百分比浓度为0.01％‑0.1％。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，在所述漂洗缓冲液中，所述氯化钠的浓度为1‑200mM，所述乙醇的浓度为10％‑100％。6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，在所述磁珠吸附液中，所述0.5‑1.5μm磁珠的浓度为10‑100mg/mL，所述40‑300nm磁珠的浓度为10‑100mg/mL，所述MOPSO缓冲液的浓度为10‑100mM，所述防腐剂的质量百分比浓度为0.01％‑0.1％。7.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述0.5‑1.5μm磁珠：所述40‑300nm磁珠的比例为0.5‑3：1。8.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述非离子去垢剂为乙基苯基聚乙二醇；所述阴离子去垢剂为十二烷基硫酸钠；所述防腐剂为ProClin300；所述稳定剂为葡聚糖和甘露醇。所述0.5‑1.5μm磁珠为：粒径为0.5‑1.5μm的硅基磁珠或硅羟基磁珠；所述40‑300nm磁珠为：粒径为40‑300nm的硅基磁珠或硅羟基磁珠。9.一种提取核酸的方法，其特征在于，所述方法基于如权利要求1‑8任一项所述的核酸提取试剂盒，所述方法包括以下步骤：将裂解缓冲液、蛋白酶K冻干粉以及磁珠吸附液与样品混合，以便获得吸附有核酸的磁珠；采用漂洗缓冲液对所述吸附有核酸的磁珠进行清洗处理，清洗后固液分离，并收集所述吸附有核酸的磁珠；2CN114634925A权利要求书2/2页采用洗脱液对清洗后的所述吸附有核酸的磁珠进行洗脱处理，洗脱后固液分离，并收集上清液，以便获得核酸溶液。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，按体积份数计，所述裂解缓冲液为30‑50份，所述蛋白酶K冻干粉为0.1‑50份，所述磁珠吸附液为1‑5份，所述样品为10‑30份，所述漂洗缓冲液为50‑100份，所述洗脱液为3‑20份。3CN114634925A说明书1/9页一种核酸提取试剂盒以及提取核酸的方法技术领域[0001]本申请涉及生物技术领域，特别是涉及一种核酸提取试剂盒以及提取核酸的方法。背景技术[0002]核酸的分离与纯化技术是分子生物学实验的一项基本技术，从最初的目的基因提取到PCR产物纯化或“胶回收”、以及基因克隆中质粒的提取等实验过程，都离不开核酸提取。[0003]现有技术