一种核酸提取试剂盒及核酸提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114350649A(43)申请公布日2022.04.15(21)申请号202111463437.5(22)申请日2021.12.02(71)申请人力因精准医疗产品（上海）有限公司地址201609上海市松江区叶榭镇叶旺路59号(72)发明人吴迪安淑英张献新朱德新(74)专利代理机构上海三方专利事务所(普通合伙)31127代理人吴玮(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种核酸提取试剂盒及核酸提取方法(57)摘要本发明公开了一种核酸提取试剂盒及核酸提取方法，所述一种核酸提取试剂盒，其组成成分包括：裂解结合液、第一漂洗液、第二漂洗液、洗脱液和蛋白酶K消化液，其中，所述蛋白酶K消化液在使用前需要用所需溶液溶解蛋白酶K，浓度在10‑40mg/mL。本发明所公开的一种核酸提取试剂盒及核酸提取方法，配方中仍有蛋白酶K，漂洗过后，蛋白酶K不易残留，提取过程简单快捷，最终提取出来的核酸浓度大，纯度高，市场应用前景广阔。CN114350649ACN114350649A权利要求书1/1页1.一种核酸提取试剂盒，其特征在于包括裂解结合液，裂解结合液包括：1M‑6M异硫氰酸胍溶液，10mM‑1MpH6.0‑7.2的Tris‑HCl缓冲液，1mM‑100mMEDTA缓冲液，10%‑30%(v/v)的异丙醇，0.05%‑0.2%(w/v)的SDS缓冲液，1%‑10%(v/v)的TritionX‑100;0.5M‑1M的氯化钠溶液，以及余量的水；第一漂洗液，第一漂洗液包括：1M‑6M异硫氰酸胍溶液，10mM‑1MpH6.0‑7.2的Tris‑HCl缓冲液，1mM‑100mMEDTA缓冲液，10%‑30%(v/v)的异丙醇，以及余量的水；第二漂洗液，第二漂洗液包括：1mM‑100mM的TrizmaBase缓冲液，以及余量的水；洗脱液，洗脱液包括：0.01mM‑10mMEDTA缓冲液，1mM‑100mM的TrizmaBase缓冲液，以及余量的水；蛋白酶K消化液，蛋白酶K消化液包括：1mM‑10mM的氯化钙溶液，30%‑60%(v/v)的甘油，1mM‑100mM的海藻糖溶液，1mM‑100mM的TrizmaBase缓冲液，0.01%‑1%(v/v)的Proclin‑300，以及余量的水。2.一种采用如权利要求1所述一种核酸提取试剂盒，其特征在于，所述第二漂洗液使用前需要添加1‑10倍体积的无水乙醇。3.一种采用如权利要求1所述一种核酸提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K消化液在使用前，需用所述溶液溶解蛋白酶K，浓度在10‑40mg/mL。4.一种采用如权利要求1所述一种核酸提取试剂盒的核酸提取方法，其特征在于，方法具体如下：S1，将蛋白酶K消化液，裂解结合液、唾液或口拭子样品混合，获得第一混合物；S2，将所述第一混合物在50‑70℃水浴中孵化30‑60min，获得孵化过的混合物；S3,将经过孵化后的混合物加入磁珠，振荡混匀后得到第二混合物，静置处理；S4，将所述经静置处理的第二混合物置于磁力架上，进行磁吸，直至磁珠完全被吸附后弃去上清液，将吸附有核酸的磁珠取下，对所属吸附有核酸的磁珠，使用第一漂洗液进行第一次漂洗液处理；S5,将经过第一次漂洗处理的磁珠置于磁力架上，进行磁吸，直至磁珠完全被吸附后弃去上清液，将磁珠取下后用第二漂洗液处理，所述第二漂洗液处理采用添加了1‑10倍无水乙醇，进行第二次漂洗处理；S6，将第二次清洗处理的磁珠置于磁力架上，进行磁吸，直至磁珠完全被吸附后弃去上清液，将磁珠取下后用第二漂洗液处理，所述第二漂洗液处理采用添加了1‑10倍无水乙醇，进行第三次漂洗处理；S7,将第三次清洗处理的磁珠置于磁力架上，进行磁吸，直至磁珠完全被吸附后弃去上清液，并置于室温晾干，将晾干的磁珠与洗脱液混合，对吸附核酸的磁珠进行洗脱处理，50‑70℃水浴孵育5‑10分钟，以及将完成洗脱的混合液置于磁力架上，进行磁吸，获得核酸。2CN114350649A说明书1/5页一种核酸提取试剂盒及核酸提取方法技术领域[0001]本发明专利涉及核酸提取技术领域，具体来说是一种核酸提取试剂盒及核酸提取方法。背景技术[0002]核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，不同的核酸，其化学成分、核苷酸排列顺序也不相同。根据化学组分不同，核酸可分为核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA），在蛋白质的复制和合成中起着储存和传递遗传信息的作用。目前，在分子生物学科的各项研究检测领域都离不开核酸的检测，提取纯化的核酸技术是分子生物学研究和临床检测的基础。[0003]目前分子生物领域常用的核