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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113454204A(43)申请公布日2021.09.28(21)申请号202080015959.6(74)专利代理机构北京坤瑞律师事务所11494(22)申请日2020.01.10代理人封新琴(30)优先权数据(51)Int.Cl.19002782019.01.11FRC12N1/12(2006.01)C07K14/405(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日A23L33/195(2006.01)2021.08.20C07K1/30(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2020/0505492020.01.10(87)PCT国际申请的公布数据WO2020/144331FR2020.07.16(71)申请人费尔曼塔格公司地址法国利布尔讷(72)发明人O·科尼亚克A·阿萨姆J·德摩尔权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称用于提取藻蓝蛋白的方法(57)摘要本发明涉及一种用于借助选择性沉淀提取和纯化通过发酵微藻产生的、特别是由嗜硫原始红藻(Galdieriasulphuraria)产生的藻蓝蛋白的新方法。CN113454204ACN113454204A权利要求书1/1页1.一种用于从初始藻蓝蛋白溶液中提取藻蓝蛋白的方法,其特征在于所述方法包括以下步骤:a)选择性沉淀,所述选择性沉淀包括将所述初始溶液的pH调节至在所述藻蓝蛋白较不可溶的pH值范围(也称为不稳定范围)内的选择值并且将所述溶液中的藻蓝蛋白浓缩以促进其沉淀,以及b)回收沉淀的藻蓝蛋白。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于pH调节和浓缩两个动作同时或顺序地进行,通过在浓缩前调节所述初始溶液的pH或通过在调节所述pH前浓缩所述初始溶液。3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法,其特征在于所述初始溶液是来自为生产藻蓝蛋白而培养的微生物生物质的裂解的粗溶液。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其特征在于所述藻蓝蛋白是在酸性pH下稳定的藻蓝蛋白。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其特征在于所述藻蓝蛋白是由微生物产生的微生物源藻蓝蛋白,所述微生物选自Cyanidioschyzon、Cyanidium或温泉红藻属(Galdieria)物种。6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其特征在于所述不稳定范围的pH是从4.5至5.5。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其特征在于所述浓缩包括去除水以便获得至少15g/L、优选至少20g/L、更优先至少30g/L或甚至至少40g/L的藻蓝蛋白含量。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法,其特征在于所述浓缩通过具有允许保留所述藻蓝蛋白的截止阈值的切向过滤进行。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法,其特征在于将所回收的藻蓝蛋白干燥并且任选地研磨。10.根据权利要求1至8中任一项所述的方法,其特征在于所回收的藻蓝蛋白具有至少2、优选至少3的纯度指数。11.根据权利要求10所述的方法,其特征在于所回收的藻蓝蛋白具有高于4的纯度指数。12.一种通过根据权利要求1至11中任一项所述的方法获得的纯化藻蓝蛋白。13.根据权利要求12所述的纯化藻蓝蛋白作为食品着色剂的用途。14.一种食品,其特征在于所述食品包含根据权利要求所述12的纯化藻蓝蛋白。2CN113454204A说明书1/7页用于提取藻蓝蛋白的方法技术领域[0001]本发明涉及一种用于通过选择性沉淀提取和纯化通过发酵微藻产生的、特别是由嗜硫原始红藻(Galdieriasulphuraria)产生的藻蓝蛋白的新颖方法。背景技术[0002]通过硫酸铵沉淀纯化从嗜硫原始红藻和螺旋藻属(Spirulina)中提取的藻胆蛋白已描述在文献(Moon等人,2015;CruzdeJesús等人,2006,CN106190853)中,但在工业规模上应用非常困难,因为它需要大量的硫酸铵,这给硫酸铵和上清液的再加工带来显著的问题。[0003]描述为获得高纯度水平的其他纯化方法,诸如色谱法或离子交换树脂纯化(JP2004359638),实施起来非常昂贵。[0004]已经描述了在粗藻蓝蛋白溶液中添加酸来纯化螺旋藻属藻蓝蛋白(TN2009000406、JP2004359638、JP06271783、CN106190853)。然而,考虑到螺旋藻属藻蓝蛋白的等电点约4.5并且接近于大量其他蛋白质的等电点,这种方法不允许选择性沉淀并且因此不允许纯化藻蓝蛋白。类似地,一些人描述了使用水杨酸从螺旋藻属中沉淀藻蓝蛋白(WO2016/030643)。使用这种酸会产生PC的非选择性沉淀,并且所得的沉淀物特别难以再溶解。用温泉红藻属PC(GaldieriaPC)获得了相同的结果。[0005]藻