一种藻蓝蛋白快速提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113480638A(43)申请公布日2021.10.08(21)申请号202110925095.8(22)申请日2021.08.12(71)申请人海南绿藻世界生物科技有限公司地址571152海南省海口市国家高新技术产业开发区狮子岭工业园光伏北路18号研发办公楼2层(72)发明人黄成潭潘军叶蕾黄敏(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人潘颖(51)Int.Cl.C07K14/795(2006.01)C07K1/14(2006.01)C07K1/30(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种藻蓝蛋白快速提取方法(57)摘要本发明涉及蛋白提取技术领域，特别涉及一种藻蓝蛋白快速提取方法。该方法包括如下步骤：将含有微藻的养殖水与蛋白保护剂混合，经第一离心，得到浓缩藻液；将浓缩藻液与细胞冷冻保护剂混合，经反复冻融，得到解冻后的浓缩藻液；将解冻后的浓缩藻液与蛋白保护剂、表面活化剂混合，进行细胞破碎，得到破碎后的藻液；将破碎后的藻液进行第二离心，得到上清液；将上清液与硫酸铵、聚丙二醇混合，搅拌；将搅拌好的料液进行第三离心，得到沉淀；将所得沉淀用乙醇水溶液清洗，经第四离心，将沉淀物进行冷冻干燥。本发明提取方法操作简便快速，成本低廉，获得的藻蓝蛋白纯度高。CN113480638ACN113480638A权利要求书1/1页1.一种藻蓝蛋白快速提取方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤(1)将含有微藻的养殖水与蛋白保护剂混合，经第一离心，得到浓缩藻液；步骤(2)将浓缩藻液与细胞冷冻保护剂混合，经反复冻融，得到解冻后的浓缩藻液；步骤(3)将解冻后的浓缩藻液与蛋白保护剂、表面活化剂混合，进行细胞破碎，得到破碎后的藻液；步骤(4)将破碎后的藻液进行第二离心，得到上清液；步骤(5)将上清液与硫酸铵、聚丙二醇混合，搅拌；步骤(6)将搅拌好的料液进行第三离心，得到沉淀；步骤(7)将所得沉淀用乙醇水溶液清洗，经第四离心，将沉淀物进行冷冻干燥。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述蛋白保护剂为叠氮钠；步骤(1)，在含有微藻的养殖水中，所述蛋白保护剂的加入量为0.1～0.5mg/L。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述第一离心的转速5000～10000rpm，所述浓缩藻液的含水量为50％～70％。4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述细胞冷冻保护剂为丙三醇；步骤(2)，在浓缩藻液中，所述细胞冷冻保护剂的加入量为5～10g/kg。5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述反复冻融的程序为：‑20～‑10℃冷冻12～24h，10～30℃解冻6～12h，重复2～3次。6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述表面活化剂为吐温80和陶氏DF104聚醚消泡剂；步骤(3)，在解冻后的浓缩藻液中，所述蛋白保护剂的加入量为1～2mg/L，所述吐温80的加入量为1～5mL/L，所述陶氏DF104聚醚消泡剂的加入量为1～2mL/L。7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述第二离心的转速为2000～3000rpm，时间为40～60min。8.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(5)，在上清液中，硫酸铵的加入量为10～15g/L，聚丙二醇的加入量为5～30mL/L；所述搅拌的转速为500～1000rpm，时间为1～2h。9.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述第三离心的转速为5000～10000rpm，时间为20～40min。10.根据权利要求1至9中任一项所述的提取方法，其特征在于，所述乙醇水溶液的浓度为20％～50％；所述第四离心的转速为5000～10000rpm，时间为20～40min。2CN113480638A说明书1/6页一种藻蓝蛋白快速提取方法技术领域[0001]本发明涉及蛋白提取技术领域，特别涉及一种藻蓝蛋白快速提取方法。背景技术[0002]微藻是地球上最古老的物种之一，具有丰富的营养成分，在畜牧、环境保护、医药、化妆品、食品等领域都有着广泛的应用，也被世界粮农组织誉为21世纪人类最理想，最完美的食品。同时，微藻是水产养殖动物终生或特定发育阶段的饵料(或饵料的饵料)，作为重要基础之一，很大程度上支撑着水产养殖产业。微拟球藻生长迅速、细胞颗粒小、富含EPA等不饱和脂肪酸、营养比较全面，同时具有较厚细胞壁的特点。微藻是水体生态系统的初级生产力，含有丰富的蛋白质、多不饱和脂肪酸、类胡萝卜素、维生素等营养物质；微藻在给水生动物提供食物的同时，还能够通过光合作用，吸收水体中多余的氨氮、磷等物质，起到稳定和改善水质的作用，因此在水产养殖业中有着广泛的应用。[0003]藻蓝蛋白是微藻中重