螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115894669A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202211338223.XC07K1/14(2006.01)(22)申请日2022.10.28(71)申请人广西中医药大学地址530200广西壮族自治区南宁市青秀区五合大道13号(72)发明人张玲陈盛仕刘梓宜李梦琪米顺利陈显强(74)专利代理机构广西南宁公平知识产权代理有限公司45104专利代理师黄宗全(51)Int.Cl.C07K14/795(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/22(2006.01)C07K1/20(2006.01)权利要求书1页说明书12页附图3页(54)发明名称螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法(57)摘要本发明公开了一种螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法，包括溶胀法破壁、活性炭吸附法提取和疏水层析纯化三个步骤。其中，发明人以藻蓝蛋白纯度和回收率为指标，考察了溶胀法破壁、活性炭吸附法提取工艺步骤中影响因素对产品的影响，并结合响应面法优化确定了最佳工艺参数条件。最后一步采用疏水层析法纯化得到食品级藻蓝蛋白(P≥0.7)和医药级藻蓝蛋白(P≥3.0)，总回收率为61.15％。因此，本发明溶胀‑活性炭吸附‑疏水层析三步提纯藻蓝蛋白工艺合理可行，实现了医药级藻蓝蛋白的分离提纯，降低了工业生产成本，具有实用价值。总之，本发明工艺成本低、效率高、实用性强，适用于规模化工业生产高纯度藻蓝蛋白。CN115894669ACN115894669A权利要求书1/1页1.一种螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法，其特征在于包括溶胀法破壁、活性炭吸附法提取和疏水层析纯化三个步骤；所述溶胀法破壁中料液比1:10～1:200、溶胀时间6～36h、溶胀次数1～3次；所述活性炭吸附法提取中活性炭数目100～500目、活性炭加入量0.1～0.9g/20mL、吸附时间5～25min；所述疏水层析纯化中疏水层析填料为ButylFourose4FF疏水层析填料，洗脱液梯度依次为含0.6mol/L硫酸铵的0.05mol/LPBS、含0.3mol/L硫酸铵的0.05mol/LPBS、0.05mol/LPBS、纯水。2.根据权利要求1所述的螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法，其特征在于：所述溶胀法破壁中料液比1:20、溶胀时间24h、溶胀次数2次；所述活性炭吸附法提取中活性炭数目300目、活性炭加入量0.5g/20mL、吸附时间10min。3.根据权利要求1所述的螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法，其特征在于该法中所用螺旋藻为钝顶螺旋藻干粉。4.根据权利要求1所述的螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法，其特征在于所述溶胀法破壁按以下进行操作：精密称取螺旋藻干粉，按料液比加入纯水进行溶胀，反复多次溶胀，合并每次溶胀所得藻液，后经超声静置离心得上清液一。5.根据权利要求4所述的螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法，其特征在于所述活性炭吸附法提取按以下进行操作：取溶胀所得的上清液一，加入活性炭静置吸附，经离心得上清液二。6.根据权利要求5所述的螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法，其特征在于所述疏水层析纯化按以下进行操作：将活性炭吸附法提取后所得上清液二，经超滤浓缩后，采用含0.6mol/L硫酸铵的0.05mol/LPBS磷酸缓冲液预平衡的疏水层析填料进行梯度洗脱，流速控制为2mL/min，3min/管，分别合并纯度1‑2，2‑3和大于3的蛋白液。7.根据权利要求5所述的螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法，其特征在于：所述超滤浓缩截留5000MWCO。8.根据权利要求1所述的螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法，其特征在于该法所得藻蓝蛋白为食品级藻蓝蛋白或医药级藻蓝蛋白。2CN115894669A说明书1/12页螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法技术领域[0001]本发明属于藻蓝蛋白制备技术领域，尤其涉及一种螺旋藻藻蓝蛋白的提取纯化方法。背景技术[0002]藻蓝蛋白(Phycocyanin)是一种存在于蓝藻中，含开链四吡咯构造的天然蓝色素，具有吸收和传递功能的性质，属胞内蛋白，在螺旋藻中含量较高。由于藻蓝蛋白具有极高的营养价值以及抗炎、抗疲劳、抗肿瘤、提高人体免疫力等药理作用，因而被普遍应用于食品、化妆品、保健品和医药等领域，具有广阔的应用前景。[0003]藻蓝蛋白提取纯化主要分为破壁、粗提和纯化3步，其中细胞破碎的方法有溶胀法、超声波细胞破壁法、冻融法、机械破壁法、化学试剂法、溶酶法等，试验中常用其中一种或两种方法联用对藻蓝蛋白进行破壁。藻蓝蛋白提取一般采用盐析法、等电点沉淀法、超滤法和吸附法，其中吸附法是利用吸附剂吸附杂质或蛋白从而提取蛋白，常用的吸附剂有活性炭和壳聚糖。此方法相比盐析法，所用的试剂价格便宜、不造成环境污染且用量较少，少量的吸附剂即可吸附杂质，无需大