一种螺旋藻藻蓝蛋白和藻多糖同时提取和分离纯化的工艺.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115724948A(43)申请公布日2023.03.03(21)申请号202111053642.4(22)申请日2021.09.01(71)申请人内蒙古藻蓝生物科技有限责任公司地址017000内蒙古自治区鄂尔多斯市鄂托克旗螺旋藻产业园区E-18(72)发明人于建成(51)Int.Cl.C07K14/795(2006.01)C07K1/14(2006.01)C07K1/16(2006.01)C07K1/30(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/36(2006.01)C08B37/00(2006.01)权利要求书2页说明书4页附图1页(54)发明名称一种螺旋藻藻蓝蛋白和藻多糖同时提取和分离纯化的工艺(57)摘要本发明公开了一种螺旋藻藻蓝蛋白和藻多糖同时提取和分离纯化的工艺，包括如下步骤；S1，固液分离；S2，将步骤S1中获得的液体进行超滤，S3，向步骤S2中的上清液一中加适量硫酸铵混匀，静置后离心，获得沉淀；调节步骤S2中的上清液二的pH至酸性，静置后离心，获得上清液三；S4，获得藻蓝蛋白初纯化溶液；S5，获得藻蓝蛋白纯化溶液；S6，浓缩得多糖；S7，合并得高纯度藻蓝蛋白；本发明在兼顾多糖回收率的前提下，能同时提取纯化高纯度的藻蓝蛋白多糖，提高了螺旋藻的蛋白与多糖综合提取纯化的效率，实现高附加值的综合利用。CN115724948ACN115724948A权利要求书1/2页1.一种螺旋藻藻蓝蛋白和藻多糖同时提取和分离纯化的工艺，其特征在于，包括如下步骤；S1，将螺旋藻进行破壁产生藻液，藻液进行固液分离，所得液体为藻蓝蛋白与第一部分多糖混合粗提液，所得固体作为提取纯化第二部分多糖使用；S2，将步骤S1中获得的液体进行超滤，透过液为第一部分多糖溶液；浓缩液中加入适量硫酸铵混匀，静置后离心，获得上清液一；将步骤S1中获得的固体溶于水，调节pH至碱性，进行碱提破壁，再将其离心，获得上清液二，所得上清液二为第二部分多糖粗提液；S3，向步骤S2中的上清液一中加适量硫酸铵混匀，静置后离心，获得沉淀；调节步骤S2中的上清液二的pH至酸性，静置后离心，获得上清液三；S4，将步骤S3中的沉淀用磷酸盐缓冲溶液溶解，并用去离子水作为脱盐流动相进行脱盐，脱盐后的溶液为藻蓝蛋白初纯化溶液；S5，将步骤S4的藻蓝蛋白初纯化溶液，过聚丙烯酸脂层析柱，用洗脱液进行梯度洗脱，分别收集洗脱液的组分，检测各组分中藻蓝蛋白的纯度和浓度，将富含藻蓝蛋白的组分用磷酸盐缓冲液作为流动相进行脱盐，以获得藻蓝蛋白纯化溶液；S6，将步骤S3的上清液三，过聚丙烯酸脂层析柱，进行吸附杂蛋白，收集穿透峰，得第二部分多糖溶液；在将第二部分多糖溶液与步骤S2获得的第一部分多糖溶液合并，浓缩得多糖；S7，将步骤S5中获得的藻蓝蛋白纯化溶液过羟基磷灰石层析柱，用洗脱液进行梯度洗脱，分别收集洗脱液组分，合并得高纯度藻蓝蛋白。2.根据权利要求1所述的一种螺旋藻藻蓝蛋白和藻多糖同时提取和分离纯化的工艺，其特征在于，所述步骤S1包括：将螺旋藻干粉按照料液比1∶20加入0.02mol/L的pH7.0磷酸盐缓冲溶液，搅拌溶胀5h；再将搅拌溶胀后的溶液进行离心，分离得所述液体和所述固体。3.根据权利要求1所述的一种螺旋藻藻蓝蛋白和藻多糖同时提取和分离纯化的工艺，其特征在于，所述步骤S2包括：将步骤S1中获得的液体用5KDa进行超滤，透过液为第一部分多糖溶液，浓缩液中加入硫酸铵至饱和度为20％，混匀，静置后离心，弃沉淀，取上清液一；将步骤S1中获得的固体按照固液比1∶20加入水，并用1mol/L氢氧化钠调节pH12，搅拌提取2h之后离心，取上清液二。4.根据权利要求1所述的一种螺旋藻藻蓝蛋白和藻多糖同时提取和分离纯化的工艺，其特征在于，所述步骤S5采用0.02mol/L、pH＝7.0、3～5倍柱体积的磷酸盐缓冲液平衡弱阴离子聚丙烯酸脂层析柱，平衡后，将藻蓝蛋白初纯化溶液上样，上样量为柱床体积的1/3～2/3；用含2mol/L氯化钠的0.02M、pH＝7.0的磷酸盐缓冲溶液进行梯度洗脱，洗脱线速度为200～300cm/h。5.根据权利要求1所述的一种螺旋藻藻蓝蛋白和藻多糖同时提取和分离纯化的工艺，其特征在于，所述步骤S6采用0.02mol/L、pH＝4.0、3～5倍柱体积的醋酸‑醋酸铵缓冲液平衡强阳离子聚丙烯酸脂层析柱，平衡后上样，上样量为柱床体积的1/3～2/3；上样后经过一个穿透峰开始收集一个穿透峰，洗脱线速度为200～300cm/h。6.根据权利要求1所述的一种螺旋藻藻蓝蛋白和藻多糖同时提取和分离纯化的工艺，其特征在于，所述步骤S7采用0.01mol/L、pH＝7.0、3～5倍柱体积的磷酸盐缓冲液平衡羟基磷灰石层析柱，平