一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113462750A(43)申请公布日2021.10.01(21)申请号202110730255.3(22)申请日2021.06.29(71)申请人浙江峻山生物科技有限公司地址312300浙江省绍兴市杭州湾上虞经济技术开发区(72)发明人张锋吴金荣(74)专利代理机构北京维正专利代理有限公司11508代理人全万志(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)C12Q1/70(2006.01)C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书12页附图4页(54)发明名称一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液及其制备方法(57)摘要本申请涉及医学分子检测领域，更具体地说，它涉及一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液及其制备方法，其中样本保存液包括如下浓度范围成分的缓冲溶液：胍盐裂解剂：3～6M；金属离子络合剂：0.1～1mM；外源非特异RNA：10～200ng/L；二硫键还原剂：5～50mM；缓冲溶液的浓度为6～10mM，该保存液的pH值为7.0～8.0。该样本保存液的制备方法如下：称取胍盐裂解剂和金属离子络合剂，溶解于水中，再依次加入二硫键还原剂、非离子表面活性剂，再加入缓冲对离子配置成缓冲溶液，并调节pH值为7.0～8.0，随后加入酵母RNA并定容，混合均匀后得到样本保存液。在本申请中，通过添加酵母RNA，可以提高样本对RNAase的耐受性，进而提高样本的保存效果。CN113462750ACN113462750A权利要求书1/1页1.一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液，其特征在于，包括缓冲溶液，所述缓冲溶液中添加有如下浓度范围组分：胍盐裂解剂：3～7M；金属离子络合剂：0.1～1mM；外源非特异RNA：10～200ng/L；二硫键还原剂：1～100mM；缓冲溶液的浓度为1～20mM，该保存液的pH值为5.5～8.5。2.根据权利要求1所述的一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液，其特征在于，所述外源非特异RNA为酵母RNA。3.根据权利要求1所述的一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液，其特征在于，在缓冲溶液中，添加有占缓冲溶液总体积0.01～1vt%的非离子表面活性剂。4.根据权利要求3所述的一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液，其特征在于，所述非离子表面活性剂为聚山梨酯类表面活性剂、聚氧乙烯醚类表面活性剂或聚乙二醇醚类表面活性剂。5.根据权利要求3所述的一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液，其特征在于，在缓冲溶液中，还添加有占缓冲溶液体积0.5～8vt%的多元脂肪醇，所述多元脂肪醇为乙二醇、1，3‑丙二醇、丙三醇、丁二醇、季戊四醇中的一种。6.根据权利要求3所述的一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液，其特征在于，所述缓冲溶液中，添加有浓度为0.1～20mM的透明质酸。7.根据权利要求1所述的一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液，其特征在于，所述金属离子络合剂为EDTA、8‑羟基喹啉中的一种。8.根据权利要求1所述的一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液，其特征在于，所述二硫键还原剂为DTT、TCEP或β巯基乙醇中的一种，所述胍盐裂解剂为异硫氰酸胍。9.根据权利要求1所述的一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液，其特征在于，该样本保存液的保存温度为‑80～30℃。10.根据权利要求1～9中任意一项所述的一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液的制备方法，其特征在于，采用如下步骤：称取胍盐裂解剂和金属离子络合剂，溶解于水中，再依次加入二硫键还原剂、非离子表面活性剂，再加入缓冲对离子配置成缓冲溶液，并调节pH值为7.0～8.0，随后加入外源非特异性RNA并定容，混合均匀后得到样本保存液。2CN113462750A说明书1/12页一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液及其制备方法技术领域[0001]本申请涉及医学分子检测领域，更具体地说，它涉及一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液及其制备方法。背景技术[0002]核酸检测具有重要的临床学意义。通过RT‑PCR技术，研究RNA的转录水平，可以对相应的疾病进行检测。[0003]在核酸样本采集、保存的过程中，容易受到RNAase(即具有水解核糖残基和磷酸二酯键能力的酶)的影响，进而在检测过程中产生“假阴性”，进而造成检测的灵敏度不高。发明内容[0004]为了减少RNAase在制备和保存核酸样本过程中对DNA或RNA的影响，提高检测灵敏度，本申请提供一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液及其制备方法。[0005]一方面，本申请提供了一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液，具体采用如下技术方案：一种提高病毒核酸检测灵敏度的样本保存液，包括缓冲溶液，所述缓冲溶液中添加有如下浓度范围组