一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113599861A(43)申请公布日2021.11.05(21)申请号202110930261.3(22)申请日2021.08.13(71)申请人广东石油化工学院地址525000广东省茂名市茂南区官渡二路139号(72)发明人毕洪梅史国滨陈泽钦邱家钦陈钱铃(74)专利代理机构哈尔滨市松花江专利商标事务所23109代理人李红媛(51)Int.Cl.B01D17/022(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图2页(54)发明名称一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法(57)摘要一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，它涉及一种分离胆固醇的方法。本发明的目的是要解决目前没有方法可以将磷脂膜中的胆固醇分离的问题。方法：一、玻璃基底表面疏水基团的修饰；二、基底上磷脂膜的铺展。本发明利用玻璃基底的特殊处理，构建不同程度的纳米级亲水和疏水结构域表面，实现铺展在表面上的磷脂膜中胆固醇的抽取分离，创建了磷脂膜中胆固醇分离的新方法，具有操作简单、反应条件温和、可控性好、耗时短、成本低等优点。本发明可以使胆固醇从磷脂膜中分离出来。本发明可获得一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法。CN113599861ACN113599861A权利要求书1/2页1.一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于该方法具体是按以下步骤完成的：一、玻璃基底表面疏水基团的修饰：①、将疏水剂和甲苯混合均匀，得到疏水剂甲苯溶液；②、将清洗干净的基底浸入到疏水剂甲苯溶液中组装4h～8h，取出后使用甲苯冲洗，再氮气吹干，得到表面组装疏水基团的基底，放入4℃冰箱保存备用；二、基底上磷脂膜的铺展：①、将表面组装疏水基团的基底置于等离子清洗机中氧化处理，得到含有纳米级亲水和疏水结构的基底；②、首先将Tris缓冲液滴加到含有纳米级亲水和疏水结构的基底上，然后滴加磷脂囊泡溶液，磷脂囊泡下沉并与基底接触，破裂铺展在基底表面，最后使用Tris缓冲液冲洗掉剩余的磷脂囊泡，得到含有磷脂膜的基底；③、将含有磷脂膜的基底在室温下继续孵育5min～120min，得到分离胆固醇后的磷脂膜。2.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤一中所述的疏水剂为十八烷基三甲氧基硅烷或3‑氨丙基三乙氧基硅烷；步骤一中所述的疏水剂与甲苯的体积比为1:100。3.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤一②中所述的基底为载玻片，基底的清洗过程如下：将基底在异丙醇中超声清洗10min～15min，再使用去离子水超声清洗10min～15min，最后使用氮气吹干，得到清洗干净的基底；所述的超声清洗的功率为250W～300W。4.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤二①中所述的氧化处理的工艺条件如下：压力为0.2MPa，功率为300W，氧化处理的时间为1s～30s。5.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤二②中所述的Tris缓冲液的体积与基底的表面积比(0.5mL～5mL):(3cm2～5cm2)；步骤二②中所述的磷脂囊泡溶液的体积与基底的表面积比(0.5μL～30μL):(3cm2～5cm2)。6.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤二②中所述的Tris缓冲液中三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mmol/L，NaCl的浓度为150mmol/L，CaCl2的浓度为2mmol/L。7.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤二②中所述的磷脂囊泡溶液的制备方法具体是按以下步骤完成的：(1)、将磷脂溶解到氯仿中，得到浓度为0.5mg/mL～20mg/mL的磷脂溶液；(2)、将浓度为0.5mg/mL～20mg/mL的磷脂溶液均匀涂覆到洁净的ITO导电玻璃表面，再在温度为10℃～30℃下干燥2h～3h，得到表面覆盖有磷脂层的ITO导电玻璃；(3)、将两块表面覆盖有磷脂层的ITO导电玻璃和玻璃框架组装成密闭的反应装置，向反应装置中注入反应介质溶液，再将表面覆盖有磷脂层的ITO导电玻璃的磷脂层与信号发生器相连接，在波形为正弦波、交流电压为1V～6V，频率为1Hz～104Hz的条件下反应5min～120min，得到磷脂囊泡溶液。2CN113599861A权利要求书2/2页8.根据权利要求7所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤(1)中所述的磷脂为1,2‑二油酰磷脂酰胆碱、1,2‑二棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和蛋黄卵磷脂中的一种或其中几种的混合物。9.根据权利要求7所述的一种利用修饰基底分离磷脂