嵌合抗原受体（CAR）及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113896804A(43)申请公布日2022.01.07(21)申请号202111376180.X(22)申请日2021.11.19(71)申请人北京创世客生物技术有限公司地址100000北京市昌平区双营西路78号院2号楼5层510(72)发明人张克礼雷林均(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)A61K39/00(2006.01)A61P35/00(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表5页附图3页(54)发明名称嵌合抗原受体（CAR）及其应用(57)摘要本发明涉及嵌合抗原受体(CAR)及其应用。本发明提供了一种ROR1特异性嵌合抗原受体，包括信号肽、抗人ROR1scFv、铰链区、跨膜区、4‑1BB胞内域和CD3ζ胞内域，其中抗人ROR1scFv能够和目标抗原高亲和力结合，防止脱靶效益的发生，并且其热稳定和pH稳定性好，能够耐受极端环境；进一步的，在嵌合抗原受体中引入Fc片段，可提高肿瘤杀伤效果，防止免疫因子风暴产生，提高治疗的安全性和有效性；本发明中所提供嵌合抗原受体T细胞能够显著抑制乳腺癌、卵巢癌、肺癌等实体肿瘤细胞或组织生长，为相关药物的开发和肿瘤免疫治疗提供新的方案。CN113896804ACN113896804A权利要求书1/1页1.一种ROR1特异性嵌合抗原受体，其特征在于：所述嵌合抗原受体包括信号肽、抗人ROR1scFv、铰链区、跨膜区、4‑1BB胞内域和CD3ζ胞内域，其中抗人ROR1scFv包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述轻链可变区包含分别如SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。2.根据权利要求1所述的ROR1特异性嵌合抗原受体，其特征在于：所述抗人ROR1的scFv中的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；所述抗人ROR1的scFv中的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。3.根据权利要求1所述的ROR1特异性嵌合抗原受体，其特征在于：所述嵌合抗原受体还包括人Fc结构域，所述人Fc结构域选自IgG1，其氨基酸序列如SEQIDNO:9所示。4.根据权利要求1所述的ROR1特异性嵌合抗原受体，其特征在于：所述信号肽氨基酸序列如SEQIDNO:10所示；所述铰链区氨基酸序列如SEQIDNO:11所示；所述跨膜区氨基酸序列如SEQIDNO:12所示；所述4‑1BB胞内域氨基酸序列如SEQIDNO:13所示；所述CD3ζ胞内域氨基酸序列如SEQIDNO:14所示。5.编码权利要求1‑4中任一所述ROR1特异性嵌合抗原受体的核苷酸。6.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包括如权利要求5中所述的ROR1特异性嵌合抗原受体的核苷酸。7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括如权利要求6所述的重组载体。8.权利要求1‑4中任一项所述的ROR1特异性嵌合抗原受体在制备抗肿瘤药物中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述肿瘤包括实体肿瘤和血液肿瘤。10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于：所述肿瘤包括乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、结直肠癌、头颈癌、鼻咽癌、黑色素瘤。2CN113896804A说明书1/7页嵌合抗原受体(CAR)及其应用技术领域[0001]本发明属于肿瘤免疫治疗领域和生物技术领域，具体提供了一种嵌合抗原受体(CAR)及其应用。背景技术[0002]肿瘤因其具有难治愈性、高死亡率、低愈后临床表现，而成为威胁人类健康的最严重的疾病之一，为此研究人员先后尝试了多种肿瘤治疗手段和技术，包括手术治疗、放射治疗、化学药物治疗、基因治疗等等，但是截至目前仍未找到行之有效的治疗手段。随着生物技术和免疫学研究的深入，肿瘤免疫治疗和抗肿瘤抗体受到业内的重视，自上世纪80年代以来，全球范围内已有上百种抗体并批准用于肿瘤治疗，以免疫检查点抑制剂和嵌合抗原受体T细胞为代表的新一代免疫治疗技术也得到广泛重视，并用于治疗多种恶性肿瘤。[0003]受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(receptortyrosinekinase‑likeorphanreceptor1，ROR1)是受体酪氨酸激酶(receptortyrosinekinase，RTKs)家族成员之一，与生长因子受体的酪氨酸激酶结构域具有很高的同源性。人ROR1分子由胞外区、跨膜区和胞内区组成，其胞外区包括一个免疫球蛋白样结构域(immunoglobulin‑likedomain，Ig‑like)、两个富含半胱氨酸卷曲的结构域