一种嵌合抗原受体（CAR）及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116003636A(43)申请公布日2023.04.25(21)申请号202310036183.1C07K16/28(2006.01)(22)申请日2023.01.07(71)申请人成都万俊华生物科技有限公司地址610000四川省成都市武侯区高朋西路548号1楼自编号附4223号(72)发明人肖俊华吴军卓刘彩武(74)专利代理机构北京易捷胜知识产权代理有限公司11613专利代理师齐云(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)A61K39/00(2006.01)A61K9/127(2006.01)A61P35/00(2006.01)A61P35/02(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表（电子公布）附图3页(54)发明名称一种嵌合抗原受体（CAR）及其制备方法(57)摘要本发明提供了一种嵌合抗原受体(CAR)及其制备方法。选用与目标抗原CD20具有较高亲和力的抗原结合片段，能够高效识别目标抗原，还以CD27和4‑1BB作为双共刺激因子，可能提高T细胞的激活程度，并大幅度延长CAR‑T细胞在体内的持续时间，能够发挥长效抗肿瘤作用；构建纳米脂质体药物递送系统，该脂质体内部包裹哺乳动物细胞表达载体，外部结合抗CD8抗体，实现了在体内CAR‑T细胞的组装，避免了体外人工制备CAR‑T的繁琐过程，降低了生产、运输和储存成本，同时能够有效靶向CD8+T细胞，进而产生具有强烈抗肿瘤活性的CAR‑T细胞，改善肿瘤治疗效果。CN116003636ACN116003636A权利要求书1/1页1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体还包括信号肽、靶向CD20的抗原结合片段、铰链区、跨膜区、胞内信号域CD27、4‑1BB和CD3ζ区域，所述靶向CD20的抗原结合片段具有轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。3.一种基因递送药物，其特征在于，所述药物采用脂质体包裹核酸表达载体，所述核酸表达载体携带编码权利要求1或2中所述嵌合抗原受体的核苷酸序列；所述脂质体表面修饰有CD8抗原结合片段，所述CD8抗原结合片段为单域抗原结合片段，其氨基酸序列如SEQIDNO:4所示。4.如权利要求3所述的基因递送药物，其特征在于，所述药物的制备方法包括如下步骤：将编码所述嵌合抗原受体的核苷酸序列导入哺乳动物表达载体中，以大豆卵磷脂、胆固醇和DMG‑PEG2000构建脂质体纳米颗粒LNP，使得所述LNP包裹所述哺乳动物表达载体；然后使得所述LNP表面结合所述CD8抗原结合片段，从而获得纳米递送药物颗粒。5.一种如权利要求1‑3任一项所述的嵌合抗原受体和/或权利要求3‑4任一项所述的基因递送药物在制备抗肿瘤制剂中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为白血病、淋巴瘤和/或骨髓瘤。2CN116003636A说明书1/8页一种嵌合抗原受体(CAR)及其制备方法技术领域：[0001]本发明属于疾病治疗领域，具体提供了一种嵌合抗原受体(CAR)及其制备方法。背景技术：[0002]免疫疗法彻底改变了癌症治疗的传统模式，成为了继手术、放疗和化疗之后的第四大肿瘤治疗手段，肿瘤免疫疗法中最成功的案例是免疫检查点抑制剂和以嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，CAR)T细胞为代表的过继细胞疗法(adoptivecelltherapy，ACT)。在使用传统疗法无法治愈的转移性癌症中，CAR‑T免疫疗法展现了惊人的疗效，一些患者可以实现长期缓解并可能治愈，据报道CD19CAR‑T治疗复发难治性急性B淋巴细胞白血病(B‑ALL)及复发难治性B细胞非霍奇金淋巴瘤(B‑NHL)的完全缓解率(CRR)分别是60％～90％和40％～50％；B细胞成熟抗原(BCMA)CAR‑T治疗复发难治性多发性骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)的CRR为39％～80％(冯友琴，张棋琦，胡永仙，黄河，多靶点CAR‑T治疗血液系统恶性肿瘤研究进展，临床内科杂志2022年9月第39卷第9期)。[0003]CAR通常由四个结构域组成：细胞外抗原结合结构域、间隔区或铰链区、跨膜结构域和细胞内信号结构域。抗原结合结构域通常由抗体重链(VH)和轻链(VL)的可变区通过柔性接头连接形成单链片段可变区(scFv)并决定结合特异性；有时，可以使用与其靶细胞上受体结合的天然蛋白质或肽来代替scFv。与识别通过MHC呈递的抗原的TCR不同，CAR识别并结合细胞表面表位并确定靶标特异性，不依赖于MHC。铰链