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本发明提供了一种嵌合抗原受体、CAR?T细胞及其应用,属于生物医药技术领域,所述嵌合抗原受体具有CD28和CD3ε的细胞内信号区,所述CD3ε的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。本发明的嵌合抗原受体选择仅含有一个ITAM基序的CD3ε作为第一激活信号,同时以靶向HER2人源化单链抗体P1h2作为CAR分子的胞外抗原结合区元件,在胞内共刺激信号CD28末端融合CD3ε单一ITAM序列,制备具有“新型结构”的CAR?T细胞,能特异性的杀伤肿瘤细胞,且产生细胞因子水平显著降低,诱发细胞因子风暴的风险大幅下降,安全性更高。与传统CAR?T细胞的杀伤肿瘤的效果相比,本发明的新型结构的CAR?T细胞具有更显著的抑瘤效果。